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半生一梦

木虫 (小有名气)

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[求助] 原核表达跑胶检测不到产物

本人从去年11月份断断续续做原核表达至今一直都没有成功表达
目的基因连接的是pet-28a载体受体细胞选择bl21(de3)
载体和大肠杆菌实验室的师姐都用来做过表达是ok的
表达载体在转到bl21(de3)之前也送去测序过没有问题
诱导条件也尝试过37度3h和20度18h两种
iptg浓度从0.1mM到1mM也做过优化
来来回回page胶跑了也有十几二十块了自己做的胶没有跑出来拜托师姐做的胶也没跑出来
所以一直很纠结啊求高人指点！

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1楼 2013-05-27 20:25:03

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roomofxw

木虫 (正式写手)

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★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-05-29 16:00:05
半生一梦(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-29 19:15:20

重测质粒重新转化，多挑几个菌落进行表达吧。
菌株的话，找一些小公司买一个感受态几百元钱，也很快。
当然后手，最好还是换个载体挂上trx啊，NusA啊等大标签表达一下试一试了。买个载体，酶切位点都能找到一样的，转换一下应该还是不难的。毕竟就算28表达出来的话，产量不高，还有可能有可溶性问题，到时候还得换着试