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原核表达后蛋白跑SDS-PAGE细节问题
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请问我构建好了一个原核表达载体，想表达一下蛋白试试跑SDS-PAGE。有几个细节不太懂。 1、我用IPTG诱导以后，应该取多少量的菌来超声破碎呢？表达载体是pET-32a，蛋白大小20.1KD,和18.6KD。 2、我有问到用50ml超声破碎的，然后取上清液的话我要怎么浓缩蛋白呢？ 3、我的目的只是要跑出合适大小的条带然后做个western，用HISTAG的抗体。。所以空载和我的载体肯定都会有抗原抗体反应，后来的纯化还不考虑。这样我可不可以就取10ml菌液离心。然后加PBS超声破碎然后直接上样跑？ |
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3楼2013-05-27 22:33:12
qiulongxiang
铜虫 (初入文坛)
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, 热心的虫虫 2013-05-28 08:18:44
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小丹木木: 金币+3, 热心的虫虫 2013-05-28 08:18:44
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1、我用IPTG诱导以后，应该取多少量的菌来超声破碎呢？表达载体是pET-32a，蛋白大小20.1KD,和18.6KD。 多多益善 2、我有问到用50ml超声破碎的，然后取上清液的话我要怎么浓缩蛋白呢？ 可以用半透膜，用庶糖把水份吸收 3、我的目的只是要跑出合适大小的条带然后做个western，用HISTAG的抗体。。所以空载和我的载体肯定都会有抗原抗体反应，后来的纯化还不考虑。这样我可不可以就取10ml菌液离心。然后加PBS超声破碎然后直接上样跑？ 空载和载体跑出来要有区别才行 |
2楼2013-05-27 18:58:14
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
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4楼2013-05-28 08:51:28
