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summermio

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 13.6小时
虫号: 1349262
注册: 2011-07-18
性别: MM
专业: 色谱分析

[求助] 关于双酶切后回收的问题

各位大神
我最近在做原核表达。我的蛋白编码基因大小大约只有300bp，用带酶切位点的引物p出来后连19T载体测序正确。然后用Bam HI和Hind III这两种酶切3小时。但是酶切完每次跑电泳下来切下来的T载体的条带特别亮，但是目的片段特别暗，几条带一起回收都回收不出来东西。实在很郁闷。是不是因为我的目的片段相对于T载体太小了？有什么办法能解决么？

或者我能不能直接从含T载体的大肠杆菌菌液里pcr出目的片段直接双酶切？
希望各位赐教哈

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1楼 2013-05-25 20:49:13

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stevenshi021

新虫 (小有名气)

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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
summermio(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 13:29:00

你当然可以直接PCR扩增，虽然那个可能会有引入突变的风险（当然比较小）。至于亮度的问题是因为其条带小，亮度是与DNA量成正比的。你的载体与小片段如果酶切完全，其亮度比例应该是与其DNA长度比例一致。

赞一下(1人)

2楼2013-05-26 06:13:38

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