| 查看: 4418 | 回复: 20 | |||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||||
[求助]
蛋白纯化Ni-IDA柱子出现问题
|
|||||||
|
本人做的重组蛋白大肠杆菌表达，用的PET28载体，包涵体进行变性复性后上柱子纯化，没有结合，并且柱子颜色变浅，不知道是不是变性复性组成有问题： 变性液：6M盐酸胍，50mM的Tris-HCl，10mM的DTT,pH8.5 复性液：500mM精氨酸，50mM的Tris-HCl，10%甘油，pH8.0，1升复性液加0.55g谷胱甘肽。 上柱子结合前用：50mM的Tris-HCl，300mM的NaCl，10mM咪唑，pH8.0洗柱子 样品结合后，用：50mM的Tris-HCl，300mM的NaCl，20mM咪唑，pH8.0洗柱子 再用：50mM的Tris-HCl，300mM的NaCl，250mM咪唑，pH8.0洗脱，用核算蛋白检测仪结果显示没结合上柱子，而且柱子颜色变浅很多，是不是那里有什么问题，还指望专家指教！多谢 默克的His-Tag蛋白纯化操作手册不推荐使用精氨酸，不知道为什么，有什么影响吗？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 蛋白质生物学实验经验 | 蛋白表达纯化与检测 | 实验交流 |
| 蛋白表达纯化鉴定精华 |
» 猜你喜欢
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有102人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 镍柱纯化中再生后柱子变白，什么问题？
已经有22人回复
- 蛋白质的Ni柱纯化问题
已经有23人回复
- 蛋白纯化实验用柱子的维护问题？
已经有7人回复
- 请问GE蛋白纯化的Ni柱 其中HP 和 FF有啥区别
已经有6人回复
- His Tag融合蛋白纯化
已经有8人回复
- 求助各位大神关于含组氨酸标签蛋白纯化的问题
已经有8人回复
- 关于蛋白质纯化柱子的问题
已经有9人回复
- His标签的蛋白纯化柱子
已经有10人回复
- 今天你纯化蛋白了吗？跪求柱子挂不好的原因。。。。
已经有15人回复
- 带HIS标签的可溶蛋白的纯化问题
已经有20人回复
- 关于用Ni-NTA His.bind树脂纯化原核表达蛋白
已经有16人回复
- 蛋白纯化遇到问题
已经有22人回复
- 进行羟胺裂解后，进行蛋白的二次过亲和层析住纯化问题！！！！求助啊 ！！！
已经有9人回复
- his标签蛋白纯化，不挂柱
已经有18人回复
- 关于蛋白纯化的问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于his-tagged 蛋白纯化
已经有9人回复
- 【求助/交流】关于分子筛纯化蛋白的问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】大家做蛋白纯化的都到什么型号柱子，效果怎么样呢
已经有10人回复
- 【分享】蛋白质纯化个人总结2
已经有38人回复
- 【求助/交流】SP柱子纯化蛋白，蛋白结合后，用2M NacL都没有洗脱下来，该怎么办？
已经有5人回复
- 基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
已经有26人回复
stevenshi021
新虫 (小有名气)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 545.3
- 红花: 5
- 帖子: 276
- 在线: 35.1小时
- 虫号: 2272292
- 注册: 2013-02-03
- 专业: 生物化学
5楼2013-05-20 11:07:52
2楼2013-05-20 09:06:35
会思想的芦苇
金虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1415.8
- 红花: 2
- 帖子: 360
- 在线: 166.2小时
- 虫号: 1360621
- 注册: 2011-08-04
- 专业: 生物技术药物
3楼2013-05-20 10:23:08
会思想的芦苇
金虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1415.8
- 红花: 2
- 帖子: 360
- 在线: 166.2小时
- 虫号: 1360621
- 注册: 2011-08-04
- 专业: 生物技术药物
4楼2013-05-20 10:24:16
30