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xg_sun

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助 过表达载体一直构建不成功

载体是11000左右 目的片段500bp左右 ,载体上用ncol  和 pml双酶切 ,目的片段用ncol同尾酶pcil 和pml双酶切  跑胶纯化回收 连接  摩尔浓度比  载体:目的=1:3  连接16度 过夜 neb公司连接酶 长出白菌落 但是摇菌之后扩增PCR 扩不出目的片段  重复了好几次 都是这情况  求解
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xg_sun: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-05-16 16:18:26
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-16 16:58:15
载体与目的片段大小比较悬殊,试试增加目的片段:载体的比例至1:5-1:10。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2013-05-16 07:10:10
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查看全部 11 个回答

sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xg_sun: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-05-16 16:18:18
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-16 16:58:07
长出的会不会是假阳性菌,做转化是用空质粒作对照看看;质粒酶切回收测测浓度,可能浓度太低了
要么读书,要么旅行,身体和灵魂,必须有一个在路上
2楼2013-05-15 22:38:28
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xg_sun

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sunnyboylg at 2013-05-15 22:38:28
长出的会不会是假阳性菌,做转化是用空质粒作对照看看;质粒酶切回收测测浓度,可能浓度太低了

如果有空质粒和 酶切后自己需要的质粒 会不会影响结果 谢谢
4楼2013-05-16 16:37:09
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xg_sun

铁虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-16 07:10:10
载体与目的片段大小比较悬殊,试试增加目的片段:载体的比例至1:5-1:10。

好的 我试试 谢谢
5楼2013-05-16 16:37:35
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