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蛋白质SDS-PAGE跑的条带很多，但做二维电泳点很少，且纵条纹很多，请教什么原因呢？
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| 提蛋白质，先做个小胶SDS-PAGE，跑出来的条带挺多，也挺清楚的，但是做二维电泳的结果却很不好：点很少，纵条纹很多。用的考马斯亮蓝染色的，操作方法技术都正确，就是找不到原因。求助，求助，求助！！！非常感谢！！！ |
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cicelyzh
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【答案】应助回帖
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憧雪313: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-05-16 16:32:50
憧雪313: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-05-17 22:00:10
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憧雪313: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-05-17 22:00:10
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胶条中残留少量蛋白也是正常的，不过残留太多就不好了。残留蛋白主要是因为变性不充分，蛋白表面没有充分结合SDS，电荷不够，所以电泳时会跑得非常慢。胶条从第一向下来因为表面有油，油会影响变性时溶液浸入胶条。先用镊子夹住胶条在滤纸上尽量吸去油，然后再进行变性处理。如果变性困难的样品，可以适当延长变性时间，实在不行的话，可以增加变性时的平衡缓冲液中SDS的含量。放胶条也有一定技巧，也很难说清楚。一般是先在第二向胶面上放电泳缓冲液，然后把胶条推到胶面尽量接触，然后再吸去多余的缓冲液，再用琼脂糖固定。 |
8楼2013-05-16 12:11:19
cicelyzh
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2楼2013-05-15 08:05:39
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3楼2013-05-15 11:53:56
4楼2013-05-15 14:43:21
