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憧雪313

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质SDS-PAGE跑的条带很多,但做二维电泳点很少,且纵条纹很多,请教什么原因呢?

提蛋白质,先做个小胶SDS-PAGE,跑出来的条带挺多,也挺清楚的,但是做二维电泳的结果却很不好:点很少,纵条纹很多。用的考马斯亮蓝染色的,操作方法技术都正确,就是找不到原因。求助,求助,求助!!!非常感谢!!!
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
憧雪313: 金币+1, 有帮助 2013-05-16 12:00:52
憧雪313: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-05-17 21:59:53
你做的胶条是多少cm的啊?纵条纹是2相的事,最好能传个图,顺便把实验方法附上,这样也好找原因。
3楼2013-05-15 11:53:56
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
憧雪313(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-15 08:38:51
憧雪313: 金币+1, 有帮助 2013-05-16 12:02:09
首先,你的上样量够吗?跑一向普通的SDS-PAGE的样品放到二维的2D上的量是不够的,起码需要增加3-5倍。
其次,你说的纵向条纹是什么样的,有图吗?纵向条纹的话,应该是第二向的问题。如果可以排除第二向胶本身的问题的话,有可能是胶条下来变性处理没做好。
2楼2013-05-15 08:05:39
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憧雪313

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-15 08:05:39
首先,你的上样量够吗?跑一向普通的SDS-PAGE的样品放到二维的2D上的量是不够的,起码需要增加3-5倍。
其次,你说的纵向条纹是什么样的,有图吗?纵向条纹的话,应该是第二向的问题。如果可以排除第二向胶本身的问 ...

我用11cm胶条跑的,上样量300ug,小胶SDS-PAGE上样量是15ug。上样量够的,第二向胶配方应该没什么问题呢,就是在凝胶上放胶条时,加完琼脂糖后胶条与凝胶之间有空隙,不能紧挨着,别的都没什么问题。    呵呵,胶拍照拍的很不好。

小胶SDS-PAGE.jpg



二维胶.jpg

4楼2013-05-15 14:43:21
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憧雪313

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by DBWJ at 2013-05-15 11:53:56
你做的胶条是多少cm的啊?纵条纹是2相的事,最好能传个图,顺便把实验方法附上,这样也好找原因。

我用酚提取法提取的,材料是水果。
5楼2013-05-15 14:47:25
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