应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白透析过程中出现浑浊
91/1返回列表
查看: 4450  |  回复: 18
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白透析过程中出现浑浊

我的目的蛋白是胞内可溶表达，破菌后离心取上清，将破碎上清对ph7.6的Tris-HCl缓冲液进行透析，透析过程中透析袋内出现浑浊，破菌缓冲液是含0.5M NaCl的ph8.5的Tris-HCl溶液，哪位大侠知道为什么透析过程中为什么会出现浑浊，该如何改进实验方案？！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 【分子生物】EPI帖 蛋白表达纯化与检测

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-11 14:30:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-05-11 15:35:50
一般我们做蛋白先是破碎，再纯化，然后透析！
虽然不知道你破菌之后，透析蛋白用于干嘛？我猜可能是过阳离子柱是吧？
1）.因为你破碎之后，上清中是含有许多种类蛋白的，蛋白浓度越高，protein越容易Aggregated， ...

透析是为了除盐，然后上阳离子柱，透析中沉淀下来的蛋白中确实是含有我的目的蛋白的，透析液中是不含NaCl的，我也试过用不含NaCl的破碎缓冲液进行破碎然后在不含NaCl的Tris-HCl的缓冲液中进行透析，还是会有浑浊出现。我想问沉淀下来的蛋白会不会变性？可不可以用缓冲液溶解以后继续上到阳离子柱呢？！
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-13 09:15:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhoupeng87 at 2013-05-11 15:50:59
是不是因为缓冲液是含0.5M NaCl

试过用不含NaCl的破碎缓冲液，透析中还是会出现浑浊，跟NaCl的浓度有关系吗？加NaCl是为了增加蛋白的溶解度的吧，我想确认一下这个问题
赞一下 回复此楼
10楼2013-05-13 09:16:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-05-11 22:43:45
液体浑浊就是其中的溶质的溶解度低，提高溶质的溶解度即可。让溶液pH离开蛋白质的pI，但是太酸或太碱，以免蛋白质变性，引起更多浑浊；另外，可能是其他的非目的的杂质太多了，离心、分级沉淀、层析分离出目的蛋白质 ...

加标签是不可能了，只能在破碎还有透析这边改条件
赞一下 回复此楼
11楼2013-05-13 09:24:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 草蔻年华 at 2013-05-11 20:44:17
你的蛋白的等电点是多少，是不是蛋白析出了，可以调节透析液 的PH试试。

用软件预测的蛋白等电点是8.56，不知道这个准不准啊
赞一下 回复此楼
12楼2013-05-13 09:29:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2013-05-12 19:43:14
1、你这个pH变化比较大，有些蛋白的pI值在你透析液附近，产生沉淀；
2、你的盐浓度下降的也太快，没有一个梯度；
3、破菌后的上清杂质太多，可以选择进行硫酸铵分布沉淀的方式初步除杂，然后再用你想用的buffer进 ...

那如果透析的话透析缓冲液的ph与蛋白等电点相差0.5-1个ph应该就可以的吧
赞一下 回复此楼
13楼2013-05-13 09:34:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-05-13 09:47:46
是的，许多蛋白在有盐和没盐的情况下的溶解性是不一样的！

适当的增加NaCL的含量可以提到蛋白的溶解性和蛋白复性的产率！
我想可能你的蛋白是盐溶性蛋白吧！...

我用不含NaCl的破碎缓冲液与含NaCl的破碎缓冲液分别破碎菌体以后跑电泳做了对照，我的目的蛋白的含量没有太大的区别，但是用不含NaCl的的破碎缓冲液破碎以后再透析的时候还是会出现浑浊，这个沉淀中的蛋白应该是没有变性，还可以继续用的吧？！
赞一下 回复此楼
15楼2013-05-13 09:55:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-05-13 10:28:40
你的沉淀，我也不知道还有木有活性！你怎么溶出来呢？一般的溶解方法可能溶解不出来了，你可能需要用Urea或盐酸胍溶解了！那就变性了！变性了，你还得复性！不建议你用沉淀！
因为你的蛋白是上清蛋白，你的蛋白有 ...

我的蛋白没有标签，破碎上清可以直接上离子柱吗？不需要除盐吗？我用软件预测的蛋白等电点是8.56，但是不知道它的的具体构象所以实际的等电点并不能确定
赞一下 回复此楼
17楼2013-05-13 10:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 飘零的叶子 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭