| 查看: 5057 | 回复: 18 | |||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[求助]
蛋白透析过程中出现浑浊
|
|||||
| 我的目的蛋白是胞内可溶表达，破菌后离心取上清，将破碎上清对ph7.6的Tris-HCl缓冲液进行透析，透析过程中透析袋内出现浑浊，破菌缓冲液是含0.5M NaCl的ph8.5的Tris-HCl溶液，哪位大侠知道为什么透析过程中为什么会出现浑浊，该如何改进实验方案？！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 【分子生物】EPI帖 | 蛋白表达纯化与检测 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有154人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 食用菌多糖透析时（去完蛋白之后的多糖），底部为什么会产生沉淀？
已经有6人回复
- 透析 蛋白沉淀 复性
已经有22人回复
- 透析后蛋白沉淀
已经有18人回复
- 关于细胞实验是否必须要除盐和蛋白质透析的问题
已经有11人回复
- 蛋白质透析除盐中的问题
已经有4人回复
- 透析袋透析蛋白后，透析袋上有沉淀的蛋白，怎么处理？
已经有3人回复
- 蛋白经透析袋透析后出现浑浊，急求高手帮忙~！
已经有12人回复
- 蛋白包涵体透析后杂蛋白很多，请教原因
已经有10人回复
- 最近纯化融合蛋白，请问透析需要加PMSF吗？
已经有16人回复
- 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
已经有18人回复
- PLGA微球用透析法做释药时，聚合物降解导致介质变浑，吸光度增大！
已经有10人回复
- 纯化蛋白更换所在缓冲液透析好还是超滤好
已经有5人回复
- 【求助/交流】蛋白透析终点杂质离子去除终点的判断
已经有4人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化中透析的问题！！
已经有9人回复
- 【求助/交流】请教：血红蛋白透析后什么条件浓缩在过sephadexG-75 啊
已经有5人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化后透析及浓缩问题
已经有8人回复
zhoupeng87
版主 (文学泰斗)
- 应助: 6148 (副教授)
- 贵宾: 8.516
- 金币: 47410.3
- 散金: 58001
- 红花: 566
- 沙发: 2391
- 帖子: 64964
- 在线: 9636.5小时
- 虫号: 962700
- 注册: 2010-03-06
- 性别: GG
- 专业: 无机材料化学
- 管辖: 精细化工
3楼2013-05-11 15:50:59
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, MolEPI+1, 中肯的建议！ 2013-05-11 20:43:52
飘零的叶子: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-12 09:40:06
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, MolEPI+1, 中肯的建议！ 2013-05-11 20:43:52
飘零的叶子: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-12 09:40:06
|
一般我们做蛋白先是破碎，再纯化，然后透析！ 虽然不知道你破菌之后，透析蛋白用于干嘛？我猜可能是过阳离子柱是吧？ 1）.因为你破碎之后，上清中是含有许多种类蛋白的，蛋白浓度越高，protein越容易Aggregated，然后形成沉淀！可能沉淀的并不是你的蛋白，而是杂蛋白！ 我经常将一部纯化之后！的蛋白流出，放置在4度，第二天观察发现蛋白变浑浊了，离了心之后，分别取上清与沉淀电泳，结果显示我的蛋白仍在上清！ 2）.通过透析换buffer来改变pH，可能会改变许多蛋白质的正确构象，使蛋白发生沉淀；也有可能是因为pH的改变刚好经过他的等电点，所以发生了沉淀！如果你的目的蛋白PI值在7.6~8.5之间，那么沉淀的可能是你的蛋白····· 3). 你的破碎buffer中含有500mM的盐，不知道你的透析buffer中含不含有？ 总之，我也不知道你沉淀的蛋白是否是你的蛋白，你需要将其离心之后，分别取上清和沉淀跑一次SDS-PAGE！ 你的方案得改进： 1. 最好在你的目的蛋白前加个标签，His或GST的。如果就只需要目的protein！！！那就在标签之后加个酶切位点吧！经过一步纯化之后，蛋白的浓度和纯度都会得到提高，一步纯化之后再透析不迟啊！ 2.透析还是比较慢的，建议你用脱盐柱G25换你的buffer！ 就这么多吧，希望能给你点建议！ |
2楼2013-05-11 15:35:50
4楼2013-05-11 20:44:17
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
飘零的叶子: 金币+3, ★有帮助 2013-05-13 09:31:03
飘零的叶子(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-13 12:51:02
感谢参与，应助指数 +1
飘零的叶子: 金币+3, ★有帮助 2013-05-13 09:31:03
飘零的叶子(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-13 12:51:02
| 液体浑浊就是其中的溶质的溶解度低，提高溶质的溶解度即可。让溶液pH离开蛋白质的pI，但是太酸或太碱，以免蛋白质变性，引起更多浑浊；另外，可能是其他的非目的的杂质太多了，离心、分级沉淀、层析分离出目的蛋白质，许多时候杂质不好去除，那么就想方设法把分离出目的蛋白质即可，最好的办法之一：亲和层析，可以用GST，(His)6标签，也可以不用。直接用目的蛋白质制备当克隆抗体（可以交给生物技术公司去做，最多6个月应该可以），然后用抗体-抗原亲和层析柱分离提纯。 |
5楼2013-05-11 22:43:45
