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纯化后蛋白没活性，试过很多方法都不行啊~~~
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| 各位亲爱的虫友，我过镍柱纯化蛋白，之前出现的问题是冷冻干燥后的蛋白粉末不溶，尝试透析后不冻干成粉末，直接在溶液里，然后浓缩了一下，发现还是没有活性。在网上看见有说纯化后蛋白里面如果有核酸要用DNA酶去掉，但是我不太明白核酸的存在会对酶活有影响吗？是什么原理啊？另外，我准备把组氨酸标签用凝血酶去掉，想再试一下这个~ 各位虫友有啥经验不吝赐教啊！（在做这个的同时已经准备换载体了，用PET22b（+）……） |
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【答案】应助回帖
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那你在(his)6与目的蛋白质之间构建一个5个亲水氨基酸构成的酶的切点吧，比如凝血酶的专一性切点，然后过柱时用凝血酶的洗脱液切断(his)6标签进行纯化吧。 核酸影响对酶活性很正常，两者形成了非共价的聚集体的话，使得酶的构象僵化，进而使酶的诱导契合会受限制甚至不可能；酶的底物通道会被核酸堵住使底物无法接近酶；核酸线状亲水长链分子，与酶结合后会改变酶的分子表面的微环境-----包括活性中心附近的微环境。 要去掉核酸，可用阴离子交换色谱柱。 |
2楼2013-05-09 15:41:26
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