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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 想问一下关于用pET-32a载体表达小片段蛋白
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

[求助] 想问一下关于用pET-32a载体表达小片段蛋白

我现在想用pET-32A表达两个多肽，一个81aa一个50aa的。看了半天那个图谱，有很多标签可以选择，我有个疑问是我想在想用Xba I 和EcoR I。但是这样在图谱上面，我切完以后rbs区没了并且只留下最后面那个his-tag。
是否这样我不应该在片段基因上设计终止子，直接用histag后面那个。然后表达出来的就是可以镍柱纯化的？
另外我切掉了rbs区，并且开头里lac operator很近。自身带有TAG这样可行么

附件有pET-32a图谱。。望使用的人解答一下~~
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  • 附件 1 : pET32a图谱.pdf
    • 2013-05-08 11:38:31, 37.03 K

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1楼 2013-05-08 11:38:35
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xjtu0025: 金币+1, ★有帮助 2013-05-08 22:19:19
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-08 22:58:19
没有rbs当然不行，当然你可以克隆一个rbs进来
另外atg和rbs的距离变化也不能太大  6/7是比较安全的，同RNA两个短肽第二个rbs之前最好加一个insulator，这样才能确保稳定表达。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-05-08 21:07:34
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