24小时热门版块排行榜    

查看: 1030  |  回复: 2
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

转基因猴子

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取过程中出现颗粒状物质

酶切片段连接pET28a转化JM109涂布LBK平板,单菌落很多,但是挑取单菌落摇瓶提质粒的时候出现问题。我用的是OMEGA的小提质粒试剂盒,在加完Solution2之后,并没有像正常情况变得很澄清,在加完solution3离心之后,白色物质看上去像是颗粒状,并不是正常的细胞壁和蛋白碎片那种感觉。提出来的质粒酶切验证跑胶什么东西都木有。第一次碰到这种情况,青教各位虫子是为何?
PS: 1试剂盒是新开封的。
2 我们实验室几个提质粒的同时出现了这个情况
3 提取空载体的时候没有这种情况,一切正常

那么,我觉得可能原因如下:
1 感受态细胞有问题,但是重新做过一次还是这种情况,难道我们的感受态细胞被污染了?可能性不大。
2以前做连接转化的时候单菌落并不会有这么多,这次多到像是在转质粒。不知为何?当时还很高兴,长了那么多,没想到是这么个问题。
求教!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

我还年轻,我要上路!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
转基因猴子: 金币+15 2013-05-08 08:42:04
看上去有污染源. 你可以养一管以前你自己保存的glycerol stock, 下次提质粒的时候带上, 如果这一管正常说明试剂盒没有问题. 剩下的问题查你的板, 培养液, 抗生素.
3楼2013-05-08 03:51:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
转基因猴子(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-08 02:07:20
转基因猴子: 金币+4 2013-05-08 08:42:10
提质粒前可以做下菌落PCR,选取含有目的基因的阳性克隆再提质粒。此外,如果觉得提质粒的盒子有问题可以自己配溶液提一两个看看。如果加溶液2不澄清说明菌裂解不好。
2楼2013-05-08 00:13:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分,一志愿四川大学,诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 083200学硕321分一志愿暨南大学求调剂 +3 innocenceF 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:35 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂(有工作经验) +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂(0854都可以) +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[论文投稿] 申请回稿延期一个月,编辑同意了。但系统上的时间没变,给编辑又写邮件了,没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见