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转基因猴子

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取过程中出现颗粒状物质

酶切片段连接pET28a转化JM109涂布LBK平板,单菌落很多,但是挑取单菌落摇瓶提质粒的时候出现问题。我用的是OMEGA的小提质粒试剂盒,在加完Solution2之后,并没有像正常情况变得很澄清,在加完solution3离心之后,白色物质看上去像是颗粒状,并不是正常的细胞壁和蛋白碎片那种感觉。提出来的质粒酶切验证跑胶什么东西都木有。第一次碰到这种情况,青教各位虫子是为何?
PS: 1试剂盒是新开封的。
2 我们实验室几个提质粒的同时出现了这个情况
3 提取空载体的时候没有这种情况,一切正常

那么,我觉得可能原因如下:
1 感受态细胞有问题,但是重新做过一次还是这种情况,难道我们的感受态细胞被污染了?可能性不大。
2以前做连接转化的时候单菌落并不会有这么多,这次多到像是在转质粒。不知为何?当时还很高兴,长了那么多,没想到是这么个问题。
求教!!
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
转基因猴子: 金币+15 2013-05-08 08:42:04
看上去有污染源. 你可以养一管以前你自己保存的glycerol stock, 下次提质粒的时候带上, 如果这一管正常说明试剂盒没有问题. 剩下的问题查你的板, 培养液, 抗生素.
3楼2013-05-08 03:51:28
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
转基因猴子(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-08 02:07:20
转基因猴子: 金币+4 2013-05-08 08:42:10
提质粒前可以做下菌落PCR,选取含有目的基因的阳性克隆再提质粒。此外,如果觉得提质粒的盒子有问题可以自己配溶液提一两个看看。如果加溶液2不澄清说明菌裂解不好。
2楼2013-05-08 00:13:07
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