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lulushuo

铁虫 (初入文坛)

[求助] 切胶回收过程有可能对DNA造成损伤吗?

Sample Text
最近的实验遇到了一个很怪的问题,我对载体pAcGFP1进行线性化PCR,然后切胶回收,用的是QIAGEN胶回收试剂盒,200ul的PCR体系,40ul EB洗脱后,浓度在110ng/ul左右,电泳验证也没有问题。但是当我对其高温加热时,也就是只加buffer和水,放入PCR仪,运行PCR程序,5个循环,约30min,再跑电泳,回收产物就变成弥散状态,没有主带;我用乙醇沉淀回收的PCR产物,做同样实验,DNA就会稳定存在。请问各位分子高手,是切胶回收过程对DNA造成损伤了吗?导致其在高温下不稳定?有没有遇到同样情况的同学啊?帮忙分析一下啊~~跪求!!

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gyesang

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【答案】应助回帖

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-05-06 12:22:11
你的PCR结果电泳弥散,可能是非特异性扩增多,即出现非特异性扩增带。也就是:PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。
非特异性条带的出现,其原因:一是 ...

楼上,楼主不是做PCR啊,Ta只是加了buffer和水,然后跑了5个cycle,电泳出现弥散,所以不存在非特异扩增的问题啊
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-05-06 12:27:31
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