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lulushuo

铁虫 (初入文坛)

[求助] 切胶回收过程有可能对DNA造成损伤吗?

Sample Text
最近的实验遇到了一个很怪的问题,我对载体pAcGFP1进行线性化PCR,然后切胶回收,用的是QIAGEN胶回收试剂盒,200ul的PCR体系,40ul EB洗脱后,浓度在110ng/ul左右,电泳验证也没有问题。但是当我对其高温加热时,也就是只加buffer和水,放入PCR仪,运行PCR程序,5个循环,约30min,再跑电泳,回收产物就变成弥散状态,没有主带;我用乙醇沉淀回收的PCR产物,做同样实验,DNA就会稳定存在。请问各位分子高手,是切胶回收过程对DNA造成损伤了吗?导致其在高温下不稳定?有没有遇到同样情况的同学啊?帮忙分析一下啊~~跪求!!

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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lulushuo(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-07 00:54:44
这个我离心我感觉不要紧的,我个人认为在高温处理情况下DNA会变性,所以当你直接跑胶时候DNA还my完全复性所以会产生好多非完全复性的中间体,照成你的这种弥散结果尤其是对那种高GC含量的DNA这种现象尤其严重。至于你说使用ethanol沉淀后的没有此现象我就不清楚了。
希望有帮助
10楼2013-05-06 23:50:56
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