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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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梦锁深秋2005

银虫 (小有名气)


[交流] 片段连接失败

我是556bp的片段,连接在PUC19的质粒上,用的KpnⅠ和BamHⅠ双酶切,转化涂板后质粒粗提精提均比原始质粒高一点,但PCR验证、酶切验证均没有条带,只有一些二聚体,求解释!
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意孤城_

金虫 (正式写手)


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梦锁深秋2005(gyesang代发): 金币+2, good, 同时需要减少酶切模板的量,保证载体双酶切干净哦! 2013-05-03 18:06:33
gyesang: 回帖置顶 2013-05-03 18:06:38
转化涂板后质粒粗提精提均比原始质粒高一点  什么意思?没切出来就说明片段没有连接进去,能提出来是载体自连的原因,建议酶切载体的时候加大酶切时间,保证切干净,同时做个阴性对照,不加片段,让载体自连看看和实验组的差距,如果长得一样多,那就不能用
3楼2013-05-03 16:41:35
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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
祝福,,祝福祝福,,努力,再努力!再创佳绩!
2楼2013-05-03 14:48:10
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20083630zhan

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
梦锁深秋2005(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-03 18:06:47
我觉得你应该在酶切回收之后先跑一个电泳看看,你到底是否会受到目的片段,然后再连接,因为有的是后你回收的产物太少,或者是根本没有会受到,
4楼2013-05-03 16:49:41
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wangqi1107

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
图片发过来看看,高一点事什么意思?
5楼2013-05-03 16:57:55
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