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foxhuli

木虫 (正式写手)

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[交流] cDNA凝胶电泳结果分析

这是我的cDNA PCR结果，麻烦大家帮忙分析一下，因为我们实验室几乎不涉及这一块，我也是偶然做这一部分。从人肝癌细胞中提取的RNA，然后经RT-PCR，逆转录成cDNA。电泳我用的是1.5%琼脂糖，1*TBE，65V，90min，每孔10μl左边两个是RNA，中间是1kb mark，右边两个是pcr产物，有专业人士能看一下这是否p成功了吗？

RNA,DNA.jpg

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1楼 2013-05-01 17:11:43

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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 回帖置顶 2013-05-02 12:06:14
foxhuli(gyesang代发): 金币+2, 热心的虫子，忠言逆耳！ 2013-05-02 12:06:56
foxhuli: 金币+2 2013-05-02 20:57:44

首先，绝大多数人看电泳图都是点样孔在上边，偶尔有人这样放的。这就是另类。其次，要让人看明白电泳图，必须使用图片处理软件将每个电泳孔都标注清楚了。下面我来说说关于cDNA问题：一般情况下，要检验RNA提取结果如何，好的RNA是明显的两条带，28s和18s，大小分别在1900bp和1000bp左右，28s条带亮度是18s条带亮度的1-2倍，这样的RNA才是好的，才可以用来做cDNA。再者，要检测cDNA质量也行，cDNA合成试剂盒一般情况下都会给对照mRNA，合成cDNA过程中，一起做这个对照，它的产物是一条1400bp的条带（takara试剂盒是这样的），电泳检测时，如果对照出现了1400bp条带，说明你整个cDNA反转录过程是没有问题的。正式样品的条带，就应该看你使用的是什么引物了，如果是试剂盒给的olig引物，产物是弥散的条带，没有特异条带。如果你使用的是特异引物，也就是你自己合成的目的基因的引物，那产物就是一条带，多了不对。从图中看，RNA提取就是问题，跟不用说后面实验了。