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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 急求进样后HPLC柱压升高的原因！！
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糖小串

银虫 (小有名气)

[求助] 急求进样后HPLC柱压升高的原因！！

本人在做一个抗癌药物的分析，发现进样时进一针，柱压便升高1~2MPa,分析条件是：diol二醇基色谱柱（非新柱子）,流动相乙腈：水=92：8，流速1ml/min,柱温30度，情况是这样，之前柱子是正用，分析了几天后柱压增加显著，有些堵了，由于实验紧急，就先反过来用了。冲柱子的顺序是进样前纯乙腈--70%乙腈---流动相（92%乙腈），反用后冲乙腈的柱压是3.8mpa,冲70%乙腈是6.8mpa,92%乙腈是4.2.mpa,进样后的柱压情况是 进了一针柱压变为5.2mpa,进了两针变为5.7mpa,进了第三针就变成了10mpa，不敢进了，怕柱子反用也废掉。这是为什么呢？1我的样品是过膜后稀释的，并且用流动相稀释应该也不会出现进样后晶体析出的现象，别人用这个机器的时候显示正常，这是柱子自身的问题呢？还是我的操作哪里有不对的地方？请各位前辈多多指教，不胜感激！！还想问一下，如果反用了柱子还能再正用吗？
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1楼 2013-04-17 13:25:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

qwerasdf2783

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
PSA: 金币+1, 谢谢 2013-04-18 12:46:22
如果只是进样后柱压高，你用的流动相乙腈量很高，如果进样溶剂是水的话，可能因为混合流动相使柱压上升。
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3楼2013-04-17 14:01:30
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这里讨论过，说不定对你有帮助。http://bbs.antpedia.com/thread-23671-1-1.html
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21楼2013-04-19 17:56:13
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普通回帖

糖小串

银虫 (小有名气)
还有一个现象就是发现进样后柱压升高 将柱子卸下 柱前压升高的现象，是样品于流动相的相容问题吗？
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2楼2013-04-17 13:30:54
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糖小串

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by qwerasdf2783 at 2013-04-17 14:01:30
如果只是进样后柱压高，你用的流动相乙腈量很高，如果进样溶剂是水的话，可能因为混合流动相使柱压上升。

我的检测样品全都是用流动相来稀释的 并且有个问题就是洗针前后开始升高柱压 有什么建议吗？
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4楼2013-04-17 14:12:08
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mada1986

木虫 (小有名气)
★ ★
PSA: 金币+2, 赞赞 2013-04-18 12:46:33
只怕是已经废掉了，柱子不是简单的正反都一样，正面进样的部分有分散器，保证你的流动相均匀的分布在柱床上，柱子的出口可没有这么一个装置，而且反过来用，可能会导致分散器被堵住， 而且破坏柱床的分布，导致柱效急剧下降，总而言之是相当的毁柱子。前期的柱压急剧上升有可能是进样器有脏东西，因为这个部分很容易被忽略，也不经常清洗。还有柱压明显上升的时候可以采用纯水-纯乙腈交替冲洗，同时提高柱温的方法，洗个1-2个小时。反用过的柱子还能不能正常使用基本就看你造化了
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糖小串
5楼2013-04-17 14:13:17
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糖小串

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by mada1986 at 2013-04-17 14:13:17
只怕是已经废掉了，柱子不是简单的正反都一样，正面进样的部分有分散器，保证你的流动相均匀的分布在柱床上，柱子的出口可没有这么一个装置，而且反过来用，可能会导致分散器被堵住， 而且破坏柱床的分布，导致柱效 ...

谢谢您的回复！我用的仪器型号是岛津LC-201CHT,进样器如果有脏东西，一般都是进一两针纯溶剂进行清洗，这样的话应该污染不会很大吧？不知您说的自动进样器污染应该如何清洗呢？我用的是正相色谱二醇基柱，洗针溶液是50甲醇水，可能这样会导致洗针是柱压上升，但是不应该逐渐一直升高，您觉得柱压随着分析样品数的增加逐渐增加是什么原因呢？
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6楼2013-04-17 14:55:52
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mada1986

木虫 (小有名气)
★
PSA: 金币+1, 谢谢 2013-04-18 12:46:46
不知道你现在柱子正着冲柱压是否正常，有可能反冲已经使填料塌陷。还有就是你的样品进样前是否经过过滤？流动相是否经过过滤？色谱柱前有没有预柱？我注意到你说进样后柱前压升高，还是觉得十有八九是进样器里面的进样环有脏东西。这个最好找售后工程师来做一下清理。自己拆是比较费劲。
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7楼2013-04-18 09:54:15
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gsli1987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
PSA: 金币+1, 谢谢 2013-04-18 12:46:58
糖小串: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-04-19 18:55:56
你如果有条件可以试一下手动进样看看，有可能是自动进样器的针座被进样针扎坏了导致的
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糖小串
每个人都生来孤独
8楼2013-04-18 10:11:07
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糖小串

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by gsli1987 at 2013-04-18 10:11:07
你如果有条件可以试一下手动进样看看，有可能是自动进样器的针座被进样针扎坏了导致的

如果是那样的话 应该别人用这台机器的时候也是这种情况对么？现在只是我的这个实验出现了这种情况 所以很苦恼
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9楼2013-04-18 11:26:32
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糖小串

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mada1986 at 2013-04-18 09:54:15
不知道你现在柱子正着冲柱压是否正常，有可能反冲已经使填料塌陷。还有就是你的样品进样前是否经过过滤？流动相是否经过过滤？色谱柱前有没有预柱？我注意到你说进样后柱前压升高，还是觉得十有八九是进样器里面的进 ...

谢谢mada1986!因为我用的是正相二醇基柱，但是实验室的预柱都是C18,所以没有加预柱。但是样品都是过滤后稀释进样的，流动相的超声脱气也是按常规走的，就是洗针溶液50甲醇水未过滤超声，昨天过滤后情况有改善，进样前后柱压上升较之前小，与这个有关系吗？
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10楼2013-04-18 11:32:11
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