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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC按药典方法分析出峰早，柱压高
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何超

金虫 (正式写手)

[交流] HPLC按药典方法分析出峰早，柱压高

如题，本人按10版中国药典上的色谱条件对一个分析药品进行重现，结果柱压很高，但很稳（乙腈-水系统，流速1ml/min，压力有90多，将近100bar），基线也很稳，没有问题，但东西出峰很早，2分多钟就出了（用标准品也那样），峰高和峰面积还很不稳（从200mA左右到2500左右，而且还一针大一针下），有谁遇到过类似的情况，怎么解决呀......急着毕业......就快要论文答辩了......
另外，用90%甲醇洗柱子的时候柱压一是100多，也很稳......
盼指教......
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1楼 2012-05-18 16:27:12
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何超

金虫 (正式写手)
着急毕业，盼知道者不吝赐教
如若方法可行，可追加金币！！！
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2楼2012-05-18 20:51:27
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xcc0703

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与！ 2012-05-19 09:45:27
最好把问题说清楚点。
比如 是药典那个方法？柱长？填料孔径？粒径？比表面积？等
不知道你HPLC做的多不多？压力为100bar不是100psi？峰响应是从200到2500而不是到250mA?
既然求助，为什么不把样品性质，样品配置说清楚呢？
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3楼2012-05-18 21:01:03
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何超

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xcc0703 at 2012-05-18 21:01:03:
最好把问题说清楚点。
比如 是药典那个方法？柱长？填料孔径？粒径？比表面积？等
不知道你HPLC做的多不多？压力为100bar不是100psi？峰响应是从200到2500而不是到250mA?
既然求助，为什么不把样品性质，样品配 ...

柱子是正常长度的C18柱子，250mm
我液相做的不多
压力确实是100bar
峰高确实是250mA到2500mA
已经换了一根柱子在试了，柱压还是那么高，拆下柱子后压力几乎为0，接上柱子进流动相端，出流动相端不接，柱压也还是那样，柱子应该是没问题了
现在在重做
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4楼2012-05-19 09:04:05
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瑞玲

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与！ 2012-05-19 09:45:36
何超: 金币+2, 信息有用 2012-05-19 10:06:15
其实重复药典 意义不大 因为做的时候客观条件很多 很难达到药典上的 我在药厂化验室待过 比较清楚 实在不行 可以试着调乙腈和水的比例 乙腈少一点 会出峰慢一点
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5楼2012-05-19 09:26:26
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何超

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 瑞玲 at 2012-05-19 09:26:26:
其实重复药典 意义不大 因为做的时候客观条件很多 很难达到药典上的 我在药厂化验室待过 比较清楚 实在不行 可以试着调乙腈和水的比例 乙腈少一点 会出峰慢一点

我只是要做毕业设计，做方法比较
现在时间已经很紧了......
可以调比例么？一般不都是调水相的PH么......
对于这个品种，BP上的条件里乙腈是少一些
我再看看，今天如果不行，我就直接降乙腈的比例看看吧......
希望顺利了......
峰面积不稳也可能都跟出峰时间太早有关系，2分钟......溶剂峰......
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6楼2012-05-19 10:05:56
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何超

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 瑞玲 at 2012-05-19 09:26:26:
其实重复药典 意义不大 因为做的时候客观条件很多 很难达到药典上的 我在药厂化验室待过 比较清楚 实在不行 可以试着调乙腈和水的比例 乙腈少一点 会出峰慢一点

对了，流动相可以调的范围大概多大呀？
从50%降到40%或者更低一点还算是同一个方法么......
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7楼2012-05-19 10:39:22
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xcc0703

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么不说一下样品的性质呢？

比如说 C18色谱柱，里面有无数种。粒径，孔径，比表面积，封尾，键合工艺等，里面还是有学问的。

你的流动相是过滤了吗？

给个建议，由于你不能客观的反映问题，所以网上求助不能很好的解决问题。所以最好去找学校里的高手，老师和分析中心的人。不管是去求人还是去请人吃饭，有人在旁边看着会更好解决问题。

你碰到的问题不难，应该很好解决的。
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8楼2012-05-19 11:33:44
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瑞玲

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以的 可以试着调 不一定 的
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9楼2012-05-19 11:49:47
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gsli1987

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
何超: 金币+1 2012-05-20 20:43:11
两分钟还是出峰太快了，几乎是一些不保留峰，可以降低乙腈的比例试一下，不过压力可能会更大！柱压只能用作参考，因为不同厂家的C18柱压力差别还是很大的，你有没有接保护柱呢？另外你流动相的比例是多大的？
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10楼2012-05-19 15:18:18
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yuanbolark

禁虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
何超: 金币+1 2012-05-20 20:38:22
本帖内容被屏蔽
11楼2012-05-20 12:21:23
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何超

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yuanbolark at 2012-05-20 12:21:23:
第一，看自己的柱子是否与药典的一样，关键看长短和粒径大小，同时，填料不同柱子的压力会有不同。
第二，上样浓度是否把握好，浓度大柱子压力也会高
第三，流动相 是否过滤
第四，液相的管路有时和药典不同也 ...

1，做条件重现的我做之前就看了柱子的，药典上规定的是C18柱，是不会说压力和出峰时间的问题的，感觉压力大是相对平时用类似流动相时的压力而言的
2，进样的浓度是样品的前处理觉定的，既然是重现，肯定是完全按照药典的规定做的，进样量是药典规定的，通过定量环控制
3，流动相平时也没过滤，用色谱纯是试剂，超声脱气
4，这个我也不知道怎么说了......
还是谢谢吧......
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12楼2012-05-20 20:37:58
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何超

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by gsli1987 at 2012-05-19 15:18:18:
两分钟还是出峰太快了，几乎是一些不保留峰，可以降低乙腈的比例试一下，不过压力可能会更大！柱压只能用作参考，因为不同厂家的C18柱压力差别还是很大的，你有没有接保护柱呢？另外你流动相的比例是多大的？

后面查了文献，就3分钟左右......
后面又有学长告诉我，仪器最近都压力那么高，他们都觉得应该是没有问题......
没有保护柱.....
乙腈的比例确实挺大的，50%......
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13楼2012-05-20 20:43:01
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kennywong

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
何超: 金币+1 2012-05-21 19:53:41
乙腈50%的话 在35%-65%之间的比例都可以调啊
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14楼2012-05-21 09:27:14
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xxaijwd

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得2分钟的液相峰一般都是溶剂峰啊……你的样品怎么会这么早出峰……
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15楼2012-05-21 09:53:40
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sdz0441029

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
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何超: 金币+1 2012-05-21 19:55:42
C18长柱，50%乙腈，这个柱压是正常的~关于出峰时间，是你样品与色谱柱的保留原因，稍微调一下有机相比例就行了~
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16楼2012-05-21 12:44:15
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hhw_123

金虫 (正式写手)
★ ★
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送鲜花一朵
何超: 金币+1 2012-05-21 19:56:05
你的色谱柱是新的吗？可能是色谱柱的问题（型号不同，出峰时间会不同的）。如不是，检查一下你的进样器（自动进样）或手动进样阀。检查一下你的流动相配制有无问题？其实你的色谱柱压力略高，很平常的压力。
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17楼2012-05-21 13:03:36
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gsli1987

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
何超: 金币+1 2012-05-21 19:56:36
引用回帖:
13楼: Originally posted by 何超 at 2012-05-20 20:43:01:
后面查了文献，就3分钟左右......
后面又有学长告诉我，仪器最近都压力那么高，他们都觉得应该是没有问题......
没有保护柱.....
乙腈的比例确实挺大的，50%......

那你仪器的在线过滤器要更换了
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18楼2012-05-21 13:26:08
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何超

金虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by xxaijwd at 2012-05-21 09:53:40:
我觉得2分钟的液相峰一般都是溶剂峰啊……你的样品怎么会这么早出峰……

流动相是乙腈-水，没有溶剂峰的
用了甲醇的话，就会有溶剂峰
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19楼2012-05-21 19:55:18
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yuanbolark

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
22楼2012-05-21 22:16:44
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yugijiang

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以说是哪个品种吗？个人觉得应该是你配流动相时出问题了，基本上上药典的方法不会在死时间出峰的啦
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23楼2012-06-28 08:32:17
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zhenyucheng

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
按照你所说的，压力如此之大，我觉的不是柱子的问题，你应该检查一下管路系统或者进样阀，看看是不是堵了，希望对你有帮助
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24楼2013-06-18 10:23:04
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静月晴空20楼
2012-05-21 22:01  
静月晴空21楼
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