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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 动物组织DNA提取
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)

[求助] 动物组织DNA提取 已有2人参与

急求动物组织DNA提取操作步骤及相关溶液配制方法。PS：下官是在尝试了两种种提取试剂盒之后，迫不得已选择这个方法的，各位大侠帮帮忙吧！
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1楼 2013-04-16 14:36:31
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轨未

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
hechuguiqu11: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-04-16 22:40:13
引用回帖:
8楼: Originally posted by hechuguiqu11 at 2013-04-16 19:27:22
检测基因组，无条带。PCR做的COI，28S也只有极少部分能出条带，可以进行测序。PCR条件是根据该物种相关文献做的。...

基因组加样孔有隐约亮光就可。
有出条带就证明模板没问题。可能就是你上一次的DNA提取效率低了。
有没有拿原来的试剂盒再试试。看看各种组分有没有过期之类。
ddh2o的洗脱效率不高。TE比较好。tric和edta，也可自己配。很多试剂盒里也带。洗脱之前60度温育一下TE。然后50ul，50ul的加。加一次侵润一会。再加一次浸润一会。再离心。
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today is present
9楼2013-04-16 19:32:23
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轨未

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-04-16 16:46:16
对于楼主尝试了两种试剂盒都失败，表示遗憾。
用的什么牌子的失败了呢。什么组织，肝脏？肌肉？
提DNA一般来说是最靠谱的吖，不会失败的吧。
说说你的操作处理，尤其是样品用什么保存的。说不定能发现失败的原因。
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today is present
2楼2013-04-16 14:44:12
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
取0．2g左右的肌肉于2mL的玻璃匀浆器中，加人450μLSTE液匀浆，倒人1.5mL Ep 管， 加20％ SDS25μL，蛋白酶K(10mg／mL)25μL ，50oC消化过夜，酚、氯仿和异戊醇进行常规基因组DNA抽提 ，基因组DNA置4oC冰箱中保存备用。
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3楼2013-04-16 17:16:57
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 轨未 at 2013-04-16 14:44:12
对于楼主尝试了两种试剂盒都失败，表示遗憾。
用的什么牌子的失败了呢。什么组织，肝脏？肌肉？
提DNA一般来说是最靠谱的吖，不会失败的吧。
说说你的操作处理，尤其是样品用什么保存的。说不定能发现失败的原因 ...

我提取的动物肌肉组织，实验操作都是按照试剂盒说明书进行的，只是最后溶解DNA时用的100μL ddH2O，4℃保存。DNA检测都是在提取出来之后就做的，用H2O也行的吧？
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4楼2013-04-16 18:58:12
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