应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助叶绿体线粒体分离提取
汕头大学海洋科学接受调剂
121/2返回列表12下一页
查看: 2833  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

匿名

用户注销 (初入文坛)
本帖仅楼主可见

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖 生物科学

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-25 12:44:41
已阅   同方向广播   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 斑斑热心哦！ 2011-09-20 18:08:45
水稻mtDNA

（1）线粒体的提取及纯化
①剪苗匀浆：用剪刀沿距胚轴05-1cm处将黄化苗部分剪下，并剪碎成不长于0.5cm的小碎段 (以下操作未经注明，均在4℃进行)，按5mL/g鲜重加入匀浆缓冲液（0.5mol/L蔗糖；50mmol/L Tris-HCl，pH7.5；1.0%BSA；5mmol/L EDTA），用预冷的高速组织匀浆器捣碎3-5次，每次5-8s，四层纱布过滤，收集滤液。
②收集粗提线粒体：滤液经2 000g离心15min后，收集上清，17 000g离心10min，收集沉淀，沉淀即为粗提线粒体。
③去核DNA：往此沉淀中加入0.1mL/g鲜重的酶解缓冲液（0.5mol/L蔗糖；50mmol/L Tris-HCl，pH7.5；1.0%BSA），用毛笔轻轻悬浮沉淀，悬浮液再经1 000g离心10min，取上清，加入DNaseI及MgCl2溶液，使两者的终浓度分别为100μg/mL和10mmol/L，在4℃下反应1h后，加入EDTA溶液至终浓度50mmol/L，终止DNase I的反应。
④利用蔗糖衬垫法纯化线粒体：将上述用DNase I处理过的线粒体悬液小心铺在装有Shelf缓冲液（0.6mol/L蔗糖；10mmol/L Tris-HCl，pH7.5；20mmol/L EDTA）的离心管中，Shelf缓冲液的用量为0.5mL/(g鲜重)。经17 000g，离心15min后，弃上清，用0.1mL/(g鲜重)的匀浆缓冲液悬浮沉淀，再将此线粒体悬液小心铺在装有Shelf缓冲液的离心管中(Shelf缓冲液用量同上)，17 000g离心15min，所得沉淀即为纯化的线粒体。
（2）线粒体DNA的提取
①去蛋白杂质：在纯化后的线粒体沉淀中加入裂解缓冲液（50mmol/LTris-HCl，pH 8.0；50mmol/L EDTA）0.1mL/(g鲜重)，混匀沉淀，再加入蛋白酶K和10%的SDS溶液，使两者的最终浓度分别为100μg/mL和1%，充分混匀，37℃保温2h以上，其间每隔10min振荡1次。
②抽提、低温沉淀：裂解液经等体积酚-氯仿-异戊醇(25∶24∶1)、氯仿各抽提1次后，12 000g离心取上清，再加入1/10体积的3mol/L乙酸钠和等体积的预冷异丙醇，-20℃沉淀0.5h以上。
③收集、洗涤、保存：12 000g离心10min，收集沉淀，70%乙醇洗涤1~2次，沉淀室温凉干，溶于适当体积的TE缓冲液或双蒸水中，取5ml用于琼脂糖检测，余下于-20℃保存备用
这种提法，最后可用RNA酶处理一下，否者RNA较多，跑的胶不好看！
附件中式小麦mtDNA的提取！[ Last edited by wanhscn on 2011-9-20 at 11:28 ]
赞一下(2人) 回复此楼
真相是最大的奢侈品
8楼2011-09-20 11:24:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

匿名

用户注销 (初入文坛)
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2011-08-25 13:06:03
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

晴天1882

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

只提取过动物组织的线粒体
赞一下 回复此楼
人有绝交，才有至交！
3楼2011-08-30 11:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaixin179

金虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-09-01 18:10:54
我们提取过棉花线粒体体的DNA, 用的是棉花的一周大小黄化幼苗，用的是上海杰美基因的试剂盒，缺点是提取量少，步骤较多！
赞一下(1人) 回复此楼
生物必成朝阳产业，甘做拓荒牛！
4楼2011-09-01 10:18:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tymayer

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晴天1882 at 2011-08-30 11:18:36:
只提取过动物组织的线粒体

请教一下，我用大鼠肝脏组织提取线粒体，杂质很多，是什么原因？
赞一下 回复此楼
5楼2011-09-19 14:01:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晴天1882

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by tymayer at 2011-09-19 14:01:49:
请教一下，我用大鼠肝脏组织提取线粒体，杂质很多，是什么原因？

你是用詹姆斯绿染色在显微镜下看到很多杂志吗？这个原因我也不好说啊！中途离心取沉淀和上清的次数有点多，离心时间和离心力应该都会有影响的。
赞一下 回复此楼
人有绝交，才有至交！
6楼2011-09-20 09:17:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tymayer

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 晴天1882 at 2011-09-20 09:17:18:
你是用詹姆斯绿染色在显微镜下看到很多杂志吗？这个原因我也不好说啊！中途离心取沉淀和上清的次数有点多，离心时间和离心力应该都会有影响的。

我是用的mito-tracker green 染色在荧光显微镜下观察的，老师说这个染料的特异性值得怀疑，看起来一些杂质膜片都被染色了。我用的是dounce匀浆器，觉得自己匀浆做的不太好，这个匀浆器你用过吗？
赞一下 回复此楼
7楼2011-09-20 09:23:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海的冷漠

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晴天1882 at 2011-08-30 11:18:36
只提取过动物组织的线粒体

我想知道动物组织的怎么提取，谢谢
赞一下 回复此楼
9楼2013-07-16 08:35:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jeana2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Rain_loyer at 2011-08-25 13:06:03
我做的是藻类的线粒体分离提取，我的要求是高纯的的线粒体，至少是没有核的污染。如果前辈们有提取叶绿体线粒体DNA的方法（PS去除核DNA污染的），请介绍给我看看吧，3Q~

你好~我现在也要分离提取线粒体DNA，不知你之前完成得怎样？可以分享些经验么？
赞一下 回复此楼
10楼2015-03-05 18:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Rain_loyer 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本科郑州大学，一志愿华东师范大学282求调剂 +27 熊哥xtk 2026-04-07 32/1600 2026-04-13 15:18 by xhd3152
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +26 土豆er? 2026-04-09 29/1450 2026-04-13 15:15 by 独醉梦孤城
[考研] 材料考研调剂 +29 云木达达 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 13:32 by lyh鲁老师
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +10 不会吃肉 2026-04-12 10/500 2026-04-12 22:51 by 零零二
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-08 9/450 2026-04-12 02:24 by 秋豆菜芽
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 280求调剂 +13 wzzz王 2026-04-09 13/650 2026-04-12 00:31 by 勇攀高峰0126
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-08 15/750 2026-04-11 20:28 by dongdian1
[考研] 359求调剂 +5 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 19:55 by lbsjt
[考研] 283求调剂 +22 那个噜子 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 10:41 by 逆水乘风
[考研] 288求调剂 +15 代fish 2026-04-09 16/800 2026-04-11 10:26 by wwj2530616
[考研] 一志愿211，化学310分，本科重点双非，求调剂 +23 努力奋斗112 2026-04-08 23/1150 2026-04-10 23:29 by 314126402
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +6 白云123456789 2026-04-09 8/400 2026-04-10 21:13 by zhouxiaoyu
[考研] 一志愿矿大，材料工程专硕314分，0856可调都可以 +15 无懈可击的巨人 2026-04-09 15/750 2026-04-10 18:10 by hmn_wj
[考研] 085404 298分求调剂 +10 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 11/550 2026-04-10 16:44 by wangy0907
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 一志愿中南大学物理学，英一66，求调剂 +4 长烟旖旎 2026-04-08 5/250 2026-04-10 10:31 by 颖果儿
[考研] 材料307分求大佬组收留 +17 Hll胡 2026-04-07 17/850 2026-04-09 10:53 by liuhuiying09
[考研] 264求调剂 +11 麦小叮当 2026-04-07 11/550 2026-04-08 16:05 by 一只好果子?
[考研] 计算机11408 287 求调剂 +3 LiLe5 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:15 by shanqishi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭