应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助叶绿体线粒体分离提取
121/2返回列表12下一页
查看: 2775  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

匿名

用户注销 (初入文坛)
本帖仅楼主可见

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖 生物科学

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-25 12:44:41
已阅   同方向广播   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 斑斑热心哦！ 2011-09-20 18:08:45
水稻mtDNA

（1）线粒体的提取及纯化
①剪苗匀浆：用剪刀沿距胚轴05-1cm处将黄化苗部分剪下，并剪碎成不长于0.5cm的小碎段 (以下操作未经注明，均在4℃进行)，按5mL/g鲜重加入匀浆缓冲液（0.5mol/L蔗糖；50mmol/L Tris-HCl，pH7.5；1.0%BSA；5mmol/L EDTA），用预冷的高速组织匀浆器捣碎3-5次，每次5-8s，四层纱布过滤，收集滤液。
②收集粗提线粒体：滤液经2 000g离心15min后，收集上清，17 000g离心10min，收集沉淀，沉淀即为粗提线粒体。
③去核DNA：往此沉淀中加入0.1mL/g鲜重的酶解缓冲液（0.5mol/L蔗糖；50mmol/L Tris-HCl，pH7.5；1.0%BSA），用毛笔轻轻悬浮沉淀，悬浮液再经1 000g离心10min，取上清，加入DNaseI及MgCl2溶液，使两者的终浓度分别为100μg/mL和10mmol/L，在4℃下反应1h后，加入EDTA溶液至终浓度50mmol/L，终止DNase I的反应。
④利用蔗糖衬垫法纯化线粒体：将上述用DNase I处理过的线粒体悬液小心铺在装有Shelf缓冲液（0.6mol/L蔗糖；10mmol/L Tris-HCl，pH7.5；20mmol/L EDTA）的离心管中，Shelf缓冲液的用量为0.5mL/(g鲜重)。经17 000g，离心15min后，弃上清，用0.1mL/(g鲜重)的匀浆缓冲液悬浮沉淀，再将此线粒体悬液小心铺在装有Shelf缓冲液的离心管中(Shelf缓冲液用量同上)，17 000g离心15min，所得沉淀即为纯化的线粒体。
（2）线粒体DNA的提取
①去蛋白杂质：在纯化后的线粒体沉淀中加入裂解缓冲液（50mmol/LTris-HCl，pH 8.0；50mmol/L EDTA）0.1mL/(g鲜重)，混匀沉淀，再加入蛋白酶K和10%的SDS溶液，使两者的最终浓度分别为100μg/mL和1%，充分混匀，37℃保温2h以上，其间每隔10min振荡1次。
②抽提、低温沉淀：裂解液经等体积酚-氯仿-异戊醇(25∶24∶1)、氯仿各抽提1次后，12 000g离心取上清，再加入1/10体积的3mol/L乙酸钠和等体积的预冷异丙醇，-20℃沉淀0.5h以上。
③收集、洗涤、保存：12 000g离心10min，收集沉淀，70%乙醇洗涤1~2次，沉淀室温凉干，溶于适当体积的TE缓冲液或双蒸水中，取5ml用于琼脂糖检测，余下于-20℃保存备用
这种提法，最后可用RNA酶处理一下，否者RNA较多，跑的胶不好看！
附件中式小麦mtDNA的提取！[ Last edited by wanhscn on 2011-9-20 at 11:28 ]
赞一下(2人) 回复此楼
真相是最大的奢侈品
8楼2011-09-20 11:24:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

匿名

用户注销 (初入文坛)
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2011-08-25 13:06:03
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

晴天1882

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

只提取过动物组织的线粒体
赞一下 回复此楼
人有绝交，才有至交！
3楼2011-08-30 11:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaixin179

金虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-09-01 18:10:54
我们提取过棉花线粒体体的DNA, 用的是棉花的一周大小黄化幼苗，用的是上海杰美基因的试剂盒，缺点是提取量少，步骤较多！
赞一下(1人) 回复此楼
生物必成朝阳产业，甘做拓荒牛！
4楼2011-09-01 10:18:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tymayer

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晴天1882 at 2011-08-30 11:18:36:
只提取过动物组织的线粒体

请教一下，我用大鼠肝脏组织提取线粒体，杂质很多，是什么原因？
赞一下 回复此楼
5楼2011-09-19 14:01:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晴天1882

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by tymayer at 2011-09-19 14:01:49:
请教一下，我用大鼠肝脏组织提取线粒体，杂质很多，是什么原因？

你是用詹姆斯绿染色在显微镜下看到很多杂志吗？这个原因我也不好说啊！中途离心取沉淀和上清的次数有点多，离心时间和离心力应该都会有影响的。
赞一下 回复此楼
人有绝交，才有至交！
6楼2011-09-20 09:17:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tymayer

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 晴天1882 at 2011-09-20 09:17:18:
你是用詹姆斯绿染色在显微镜下看到很多杂志吗？这个原因我也不好说啊！中途离心取沉淀和上清的次数有点多，离心时间和离心力应该都会有影响的。

我是用的mito-tracker green 染色在荧光显微镜下观察的，老师说这个染料的特异性值得怀疑，看起来一些杂质膜片都被染色了。我用的是dounce匀浆器，觉得自己匀浆做的不太好，这个匀浆器你用过吗？
赞一下 回复此楼
7楼2011-09-20 09:23:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海的冷漠

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晴天1882 at 2011-08-30 11:18:36
只提取过动物组织的线粒体

我想知道动物组织的怎么提取，谢谢
赞一下 回复此楼
9楼2013-07-16 08:35:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jeana2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Rain_loyer at 2011-08-25 13:06:03
我做的是藻类的线粒体分离提取，我的要求是高纯的的线粒体，至少是没有核的污染。如果前辈们有提取叶绿体线粒体DNA的方法（PS去除核DNA污染的），请介绍给我看看吧，3Q~

你好~我现在也要分离提取线粒体DNA，不知你之前完成得怎样？可以分享些经验么？
赞一下 回复此楼
10楼2015-03-05 18:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Rain_loyer 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +4 研研，接电话 2026-03-24 5/250 2026-03-24 10:17 by 研研，接电话
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +3 Higraduate 2026-03-22 6/300 2026-03-24 09:55 by AZMK
[考研] 材料调剂 +5 匹克i 2026-03-23 5/250 2026-03-24 08:50 by dick_runner
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 291 求调剂 +4 化工2026届毕业� 2026-03-21 5/250 2026-03-23 16:46 by 化工2026届毕业�
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[论文投稿] 申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭