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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)

[求助] 动物组织DNA提取 已有2人参与

急求动物组织DNA提取操作步骤及相关溶液配制方法。PS：下官是在尝试了两种种提取试剂盒之后，迫不得已选择这个方法的，各位大侠帮帮忙吧！
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1楼 2013-04-16 14:36:31
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

轨未

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
hechuguiqu11: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-04-16 22:40:13
引用回帖:
8楼: Originally posted by hechuguiqu11 at 2013-04-16 19:27:22
检测基因组，无条带。PCR做的COI，28S也只有极少部分能出条带，可以进行测序。PCR条件是根据该物种相关文献做的。...

基因组加样孔有隐约亮光就可。
有出条带就证明模板没问题。可能就是你上一次的DNA提取效率低了。
有没有拿原来的试剂盒再试试。看看各种组分有没有过期之类。
ddh2o的洗脱效率不高。TE比较好。tric和edta，也可自己配。很多试剂盒里也带。洗脱之前60度温育一下TE。然后50ul，50ul的加。加一次侵润一会。再加一次浸润一会。再离心。
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today is present
9楼2013-04-16 19:32:23
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普通回帖

轨未

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-04-16 16:46:16
对于楼主尝试了两种试剂盒都失败，表示遗憾。
用的什么牌子的失败了呢。什么组织，肝脏？肌肉？
提DNA一般来说是最靠谱的吖，不会失败的吧。
说说你的操作处理，尤其是样品用什么保存的。说不定能发现失败的原因。
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today is present
2楼2013-04-16 14:44:12
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
取0．2g左右的肌肉于2mL的玻璃匀浆器中，加人450μLSTE液匀浆，倒人1.5mL Ep 管， 加20％ SDS25μL，蛋白酶K(10mg／mL)25μL ，50oC消化过夜，酚、氯仿和异戊醇进行常规基因组DNA抽提 ，基因组DNA置4oC冰箱中保存备用。
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3楼2013-04-16 17:16:57
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 轨未 at 2013-04-16 14:44:12
对于楼主尝试了两种试剂盒都失败，表示遗憾。
用的什么牌子的失败了呢。什么组织，肝脏？肌肉？
提DNA一般来说是最靠谱的吖，不会失败的吧。
说说你的操作处理，尤其是样品用什么保存的。说不定能发现失败的原因 ...

我提取的动物肌肉组织，实验操作都是按照试剂盒说明书进行的，只是最后溶解DNA时用的100μL ddH2O，4℃保存。DNA检测都是在提取出来之后就做的，用H2O也行的吧？
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4楼2013-04-16 18:58:12
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轨未

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by hechuguiqu11 at 2013-04-16 18:58:12
我提取的动物肌肉组织，实验操作都是按照试剂盒说明书进行的，只是最后溶解DNA时用的100μL ddH2O，4℃保存。DNA检测都是在提取出来之后就做的，用H2O也行的吧？...

肌肉组织是酒精保存的？
提取之前，研磨之后。酒精晾干了没有？
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today is present
5楼2013-04-16 18:59:19
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 轨未 at 2013-04-16 18:59:19
肌肉组织是酒精保存的？
提取之前，研磨之后。酒精晾干了没有？...

是酒精保存的，研磨前晾干。这些操作方法提取另外一个物种时很顺利。换了一个物种就不行了。样品比较新鲜。。。
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6楼2013-04-16 19:18:58
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轨未

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by hechuguiqu11 at 2013-04-16 19:18:58
是酒精保存的，研磨前晾干。这些操作方法提取另外一个物种时很顺利。换了一个物种就不行了。样品比较新鲜。。。...

另个物种很好。这个就没有。。。略诡异
检验的时候条带不亮，还是彻底没有。如果亮度不足也没关系。PCR没问题的
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7楼2013-04-16 19:21:37
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hechuguiqu11

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 轨未 at 2013-04-16 19:21:37
另个物种很好。这个就没有。。。略诡异
检验的时候条带不亮，还是彻底没有。如果亮度不足也没关系。PCR没问题的...

检测基因组，无条带。PCR做的COI，28S也只有极少部分能出条带，可以进行测序。PCR条件是根据该物种相关文献做的。
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8楼2013-04-16 19:27:22
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lanqingkuo

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们自己配试剂提取，效果也不太理想。很诡异的，SDS方法
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战斗吧，朋友
10楼2013-04-19 11:06:52
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