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求助关于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳若干问题的~~
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本人分离纯化了一种蛋白质，为酸性蛋白质，想要用非变性PAGE看一下它的纯度，但是在网上搜索了一下关于非变性PAGE电泳的内容，五花八门，有若干问题，想向各位请教： 1.怎么选择分离胶与浓缩胶浓度，有何影响？ 2.本人在有的书中看到灌胶时需要先将分离胶灌好凝固，水封后放于4度放置12h，随用时再将浓缩胶灌入使用，但有些也没有要求这一步，是不是这步可以省略？ 3.电泳蛋白质的加样量大概是什么范围？多少浓度？ |
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5楼2013-04-18 11:06:18
2楼2013-04-16 21:00:55
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 感谢搭理，：） 2013-04-18 08:16:48
稚涵晓晓: 金币+8, ★★★很有帮助 2013-04-18 10:51:41
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稚涵晓晓: 金币+8, ★★★很有帮助 2013-04-18 10:51:41
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有人理 首先浓度有影响,也是大蛋白浓度低点,小蛋白高点,但是考虑到等电点的因素,也不完全和蛋白大小相关.一般也没有marker可用,因为核质比都不一样.有种叫blue什么的胶说士可以有marker,电荷因素不那么大,但是也不如SDS PAGE那么好 灌胶后不必等那么长时间,凝了就行.长时间凝胶的好处是让胶凝得更彻底,就算SDS PAGE也是时间长点好,但是其实没必要 蛋白量不好说,一般是在可检测范围内约少越好,怕的是蛋白stuck在孔里.可使由于可能有不同的构象,一个蛋白可能会出来multi band,所以量确实需要自己找合适的量 |
3楼2013-04-17 08:48:04
4楼2013-04-18 10:50:07