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malstose

金虫 (正式写手)

[求助] ssDNA如何进行PCR？

弱弱地问一句，ssDNA如何进行PCR扩增，它不是单链吗，如何形成双链DNA继而开始PCR呢？
多谢啦！
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1楼 2013-03-23 16:12:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR时候的模板是是变性解链了的，也就是ssDNA，然后和引物anealing。所以不明白你为什么要这么问？
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2楼2013-03-23 16:46:12
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malstose

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-23 16:46:12
PCR时候的模板是是变性解链了的，也就是ssDNA，然后和引物anealing。所以不明白你为什么要这么问？

谢谢，我的意思是，在PCR扩增ssDNA病毒时候，ssDNA的另外一条互补链是在何时形成的？
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3楼2013-03-24 18:48:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by malstose at 2013-03-24 18:48:17
谢谢，我的意思是，在PCR扩增ssDNA病毒时候，ssDNA的另外一条互补链是在何时形成的？...

第一个循环的时候只有和ssDNA配对的引物扩增出模板的互补链。后面的循环就和用dsDNA做模板的PCR一样了。
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4楼2013-03-25 05:32:58
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malstose

金虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-25 05:32:58
第一个循环的时候只有和ssDNA配对的引物扩增出模板的互补链。后面的循环就和用dsDNA做模板的PCR一样了。...

谢谢，明白啦~
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5楼2013-03-25 18:44:46
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malstose

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-25 05:32:58
第一个循环的时候只有和ssDNA配对的引物扩增出模板的互补链。后面的循环就和用dsDNA做模板的PCR一样了。...

有没有可能是利用复制中间体的dsDNA来进行PCR的呢？
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6楼2013-03-25 18:45:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by malstose at 2013-03-25 18:45:21
有没有可能是利用复制中间体的dsDNA来进行PCR的呢？...

PCR本身就是会利用已经复制的分子为模板进行反应的，不知道你的疑问在哪里。
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7楼2013-03-26 01:40:58
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malstose

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-26 01:40:58
PCR本身就是会利用已经复制的分子为模板进行反应的，不知道你的疑问在哪里。...

PCR扩增不是需要两条链（+/-链）吗，刚开始我不是太明白对ssDNA病毒来说扩增所需的第二条链是如何来的，现在明白了，呵呵，感谢！
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8楼2013-03-27 12:40:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by malstose at 2013-03-27 12:40:15
PCR扩增不是需要两条链（+/-链）吗，刚开始我不是太明白对ssDNA病毒来说扩增所需的第二条链是如何来的，现在明白了，呵呵，感谢！...

PCR的时候模板是一条链。ssDNA也是会发生反应的。因为你有两个引物，所以会对引物之间的序列特异性大量扩增。我认为你在纠结一个PCR原理的问题，有时间自己看看PCR原理的书就可以明白的。
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9楼2013-03-27 14:32:01
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malstose

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-27 14:32:01
PCR的时候模板是一条链。ssDNA也是会发生反应的。因为你有两个引物，所以会对引物之间的序列特异性大量扩增。我认为你在纠结一个PCR原理的问题，有时间自己看看PCR原理的书就可以明白的。...

谢谢，呵呵~
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10楼2013-03-27 18:36:39
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