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malstose

金虫 (正式写手)

[求助] ssDNA如何进行PCR?

弱弱地问一句,ssDNA如何进行PCR扩增,它不是单链吗,如何形成双链DNA继而开始PCR呢?
多谢啦!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR时候的模板是是变性解链了的,也就是ssDNA,然后和引物anealing。所以不明白你为什么要这么问?
2楼2013-03-23 16:46:12
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malstose

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-23 16:46:12
PCR时候的模板是是变性解链了的,也就是ssDNA,然后和引物anealing。所以不明白你为什么要这么问?

谢谢,我的意思是,在PCR扩增ssDNA病毒时候,ssDNA的另外一条互补链是在何时形成的?
3楼2013-03-24 18:48:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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3楼: Originally posted by malstose at 2013-03-24 18:48:17
谢谢,我的意思是,在PCR扩增ssDNA病毒时候,ssDNA的另外一条互补链是在何时形成的?...

第一个循环的时候只有和ssDNA配对的引物扩增出模板的互补链。后面的循环就和用dsDNA做模板的PCR一样了。
4楼2013-03-25 05:32:58
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malstose

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-25 05:32:58
第一个循环的时候只有和ssDNA配对的引物扩增出模板的互补链。后面的循环就和用dsDNA做模板的PCR一样了。...

谢谢,明白啦~
5楼2013-03-25 18:44:46
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malstose

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-25 05:32:58
第一个循环的时候只有和ssDNA配对的引物扩增出模板的互补链。后面的循环就和用dsDNA做模板的PCR一样了。...

有没有可能是利用复制中间体的dsDNA来进行PCR的呢?
6楼2013-03-25 18:45:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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6楼: Originally posted by malstose at 2013-03-25 18:45:21
有没有可能是利用复制中间体的dsDNA来进行PCR的呢?...

PCR本身就是会利用已经复制的分子为模板进行反应的,不知道你的疑问在哪里。
7楼2013-03-26 01:40:58
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malstose

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-26 01:40:58
PCR本身就是会利用已经复制的分子为模板进行反应的,不知道你的疑问在哪里。...

PCR扩增不是需要两条链(+/-链)吗,刚开始我不是太明白对ssDNA病毒来说扩增所需的第二条链是如何来的,现在明白了,呵呵,感谢!
8楼2013-03-27 12:40:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by malstose at 2013-03-27 12:40:15
PCR扩增不是需要两条链(+/-链)吗,刚开始我不是太明白对ssDNA病毒来说扩增所需的第二条链是如何来的,现在明白了,呵呵,感谢!...

PCR的时候模板是一条链。ssDNA也是会发生反应的。因为你有两个引物,所以会对引物之间的序列特异性大量扩增。我认为你在纠结一个PCR原理的问题,有时间自己看看PCR原理的书就可以明白的。
9楼2013-03-27 14:32:01
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malstose

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-27 14:32:01
PCR的时候模板是一条链。ssDNA也是会发生反应的。因为你有两个引物,所以会对引物之间的序列特异性大量扩增。我认为你在纠结一个PCR原理的问题,有时间自己看看PCR原理的书就可以明白的。...

谢谢,呵呵~
10楼2013-03-27 18:36:39
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