应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 若想获得一个蛋白，如何从基因开始到纯化到拿到蛋白
41/1返回列表
查看: 768  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

leonvicki

银虫 (初入文坛)

[求助] 若想获得一个蛋白，如何从基因开始到纯化到拿到蛋白

小弟初入生物殿堂，劳烦各位大神写个详细的流程，感谢赐教
若想获得一个蛋白，如何从基因开始到纯化到拿到蛋白
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
坚持不懈，追求卓越
1楼 2013-03-14 19:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

云琪

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-15 08:02:58
感同身受呀！应该是从NCBI EMBI DDBJ  用文献中蛋白的基因号，收索你的目的基因。再 设计一对与你的载体相关的引物，先P出来你要的基因，克隆到载体上。以后的研究就是分离纯化了。这方面的知识很多，各种层析（可以参考生化分离之类的书籍的）。。。。。。。。。。。。
赞一下 回复此楼
每天进步一点点！
2楼2013-03-14 20:06:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小科研女dow

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 总结的很详细，一目了然，鼓励应助，期待更多精彩的回答！ 2013-03-15 00:34:01
小丹木木: 金币+2, MolEPI+1, 详细，热心，鼓励给予EPI 2013-03-15 08:04:36
简单说几句撒
1 首先知道了序列后设计引物
2 做引物PCR
3 电泳验证序列大小
4 切胶回收
5 与T载体连接后转换涂平板
6 依据平板菌落做菌落PCR
7 电泳验证菌落PCR结果选择正确的单菌落送去测序
8 测序结果在NCBI上BLAST证明为你所要的序列
9 挑测序正确的单菌落姐试管或者摇瓶后进行质粒中提
10 再做引物PCR
11回收PCR产物
12 将回收片段与所要载体进行双酶切
12 连接转化进入感受态后涂平板
13 质粒中提 转化进入表达感受态中
14 诱导表达
15 细胞破碎（胞内产物的话）得到粗蛋白
16 蛋白纯化（若有HIS过镍柱纯化，若无，硫酸铵梯度纯化）
17 得到纯化后的蛋白为你所用


PS：与T载体连接的一步可有可无。若急于知道是否序列正确，可先这样做。
赞一下(3人) 回复此楼
做出色的科研人
3楼2013-03-14 22:00:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackhua17

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2013-03-15 01:47:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 leonvicki 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-02 05:47 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 21/1050 2026-11-02 05:41 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 14/700 2026-11-02 05:41 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-02 05:34 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-02 03:37 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 9/450 2026-11-02 03:26 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 8/400 2026-11-02 03:24 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 11/550 2026-11-02 03:13 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 12/600 2026-11-02 03:11 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 9/450 2026-11-02 03:11 by xzcv0Tehd8lQ
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 9/450 2026-11-02 03:05 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-02 02:47 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 7/350 2026-11-01 22:05 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 16:58 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 3/150 2026-11-01 12:53 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 12:40 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 11/550 2026-11-01 12:24 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 03:59 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 2027博士申请-临床检验诊断学、病原生物学、微生物方向 50+3 yyh@ 2026-10-28 4/200 2026-10-31 12:47 by 可淡不可忘
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭