| 查看: 731 | 回复: 3 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
leonvicki银虫 (初入文坛)
|
[求助]
若想获得一个蛋白，如何从基因开始到纯化到拿到蛋白
|
||
|
小弟初入生物殿堂，劳烦各位大神写个详细的流程，感谢赐教 若想获得一个蛋白，如何从基因开始到纯化到拿到蛋白 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有292人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大肠杆菌BL21菌株表达目的蛋白时，菌液破碎前后的浑浊程度变化很不明显
已经有5人回复
- 毕赤表达一酶基因，跑蛋白电泳只有一条带，是不是不用纯化了呀
已经有10人回复
- 蛋白纯化标签有哪些?
已经有6人回复
- 想要设计引物 可是NCBI中blast后只有蛋白序列 如何得到基因序列 谢谢啊
已经有15人回复
- 如何在蛋白纯化后去除6组氨酸(6His)标签
已经有17人回复
- 蛋白纯化遇到问题
已经有22人回复
- 蛋白互作必会，GST纯化遇到的问题
已经有13人回复
- 已经带his标签目的蛋白基因如何设计引物啊（目的基因已经接在pET-22b的载体上了）
已经有8人回复
- 如何得到已知蛋白序列的对应的基因序列
已经有8人回复
- 如何进一步纯化这个蛋白？
已经有7人回复
- 求助：关于基因表达中调控蛋白和转录调控蛋白的连接和表达
已经有5人回复
- 请教一个全基因组（全蛋白质组）和完全基因组（完全蛋白质组）之间的差别？
已经有8人回复
- 【求助/交流】除了swiss-model还有别的预测基因蛋白三维结构的工具吗？
已经有8人回复
- 【求助/交流】镍柱纯化的蛋白保存在-20度一个星期，拿出来都是沉淀？？
已经有19人回复
- 【分享】蛋白质纯化个人总结2
已经有38人回复
- 【求助/交流】有关蛋白纯化及其基因克隆的问题！请大家帮助！
已经有10人回复
- 【求助/交流】SP柱子纯化蛋白，蛋白结合后，用2M NacL都没有洗脱下来，该怎么办？
已经有5人回复
- 基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
已经有26人回复
小科研女dow
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 3823.2
- 散金: 20
- 红花: 2
- 帖子: 187
- 在线: 163.4小时
- 虫号: 2112648
- 注册: 2012-11-07
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 总结的很详细，一目了然，鼓励应助，期待更多精彩的回答！ 2013-03-15 00:34:01
小丹木木: 金币+2, MolEPI+1, 详细，热心，鼓励给予EPI 2013-03-15 08:04:36
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 总结的很详细，一目了然，鼓励应助，期待更多精彩的回答！ 2013-03-15 00:34:01
小丹木木: 金币+2, MolEPI+1, 详细，热心，鼓励给予EPI 2013-03-15 08:04:36
|
简单说几句撒 1 首先知道了序列后设计引物 2 做引物PCR 3 电泳验证序列大小 4 切胶回收 5 与T载体连接后转换涂平板 6 依据平板菌落做菌落PCR 7 电泳验证菌落PCR结果选择正确的单菌落送去测序 8 测序结果在NCBI上BLAST证明为你所要的序列 9 挑测序正确的单菌落姐试管或者摇瓶后进行质粒中提 10 再做引物PCR 11回收PCR产物 12 将回收片段与所要载体进行双酶切 12 连接转化进入感受态后涂平板 13 质粒中提 转化进入表达感受态中 14 诱导表达 15 细胞破碎（胞内产物的话）得到粗蛋白 16 蛋白纯化（若有HIS过镍柱纯化，若无，硫酸铵梯度纯化） 17 得到纯化后的蛋白为你所用 PS：与T载体连接的一步可有可无。若急于知道是否序列正确，可先这样做。 |
3楼2013-03-14 22:00:19
云琪
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2.6
- 散金: 20
- 帖子: 92
- 在线: 81.2小时
- 虫号: 1265004
- 注册: 2011-04-14
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2013-03-14 20:06:29
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2013-03-15 01:47:49
投票:
30