| 查看: 7612 | 回复: 23 | |||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
[交流]
细胞瞬时转染和质粒复制
|
|||||
|
大家好！ 我有个问题 最近在做细胞转染，用的是293细胞和pcDNA3.1质粒。 我想问的是，质粒会在细胞中复制么？ 如果质粒在细胞中复制，为什么又要筛选做稳定株？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有267人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- RNA干扰实验是直接转染RNA还是转染表达该RNA的质粒？
已经有7人回复
- 质粒在细胞内能存在多久
已经有9人回复
- pEGFP重组载体转染细胞不发光，空载体发光，这是啥原因啊，急
已经有12人回复
- 瞬转中，质粒在细胞里会复制吗？
已经有6人回复
- PCR扩增法制备低拷贝质粒（替代常规质粒提取）
已经有11人回复
- 细胞稳定转染，质粒的设计
已经有15人回复
- 求一段英译汉，在线翻译器的请绕道哦
已经有6人回复
- 悬浮细胞转染
已经有28人回复
- 如何判断转染的细胞表达了自己想要的蛋白
已经有3人回复
- 请大家看看这个eGFP真核载体，为什么转染Sp2/0后看不到荧光？
已经有5人回复
- 【求助/交流】我想问下瞬时转染和稳定转染。。。
已经有8人回复
- 【求助/交流】求助：Western检测转染质粒在细胞内的表达
已经有4人回复
- 【求助/交流】请问转染了GFP的肿瘤细胞？
已经有8人回复
- 【分享】推荐一款性能最实用的转染试剂
已经有14人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
人生已过半程，不惑之年渐近，回望来时路，满心皆是感恩。
+5/1850
-
坐标上海，诚征女友，非常 着急，私信必回
+1/462
-
2026年国基求好运！
+5/265
-
祈福2026国基面上项目
+5/155
-
华南理工-广中医联合招收生物医学与材料交叉学科博士生
+1/84
-
重庆医科大学神经科学中心/病生与生理系诚邀海内外优秀博士加盟博士后队伍（长期）
+1/81
-
武汉高校接受研究生调剂，材料、化学、纺织方向
+2/50
-
光学工程学硕调剂信息
+2/42
-
河南工学院诚聘优秀凝聚态物理和电子科学与技术相关专业硕博研究生
+2/38
-
同济大学环境学院 肖倩特聘研究员课题组 招聘硕士/博士（长期有效）
+1/27
-
中山大学院士团队微纳器件、脑机接口方向博士招生、博后招聘
+1/18
-
招聘科研助理——储能方向（储能、流体传热、CFD模拟）
+1/18
-
【深圳理工大学】院士工作站招聘博士后-电催化和有机电化学
+1/16
-
【2026考研调剂】南方科技大学-深圳理工大学联培 086000 免疫方向(26.9入学)
+1/13
-
南开大学陈树琪教授研究团队招收2026级超构材料方向博士研究生
+1/10
-
华中科技大学管理学院招聘社会用工（科研助理）1名
+1/5
-
昆明理工大学陈江照教授团队博士招生
+1/4
-
125603工业工程与管理调剂
+1/1
-
“机械、材料”招生
+1/1
-
浙江大学高纯分离团队诚聘博士后
+1/1
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
★ ★ ★ ★ ★ ★
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 热心的斑斑 2013-03-13 16:31:57
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 热心的斑斑 2013-03-13 16:31:57
|
293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞，表达转染的腺病毒5的基因。 293T细胞表达 E1A蛋白和SV40大T抗原，因此含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以在其中复制。 你最近在做细胞转染，用的是293细胞和pcDNA3.1质粒，因为293细胞不含有SV40大T抗原，因此即使pcDNA3.1质粒含有SV40 ori，pcDNA3.1也不能在293细胞中复制，如果你转染的是293T细胞，那么pcDNA3.1 就可在其中复制了。 至于为什么又要筛选做稳定株，是因为质粒转染进293细胞作为episome的形式存在，不能复制，随着细胞的分裂，质粒会被随机分配到其两子代细胞中发生稀释至最终丢失。而筛选出来的稳定株，此时的质粒已经被整合进宿主染色体，随着宿主基因组DNA的复制而一起复制，并稳定遗传给子代。 |
9楼2013-03-13 15:00:13
★
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
3楼2013-03-13 11:25:54
2楼2013-03-13 11:22:42
4楼2013-03-13 13:28:02
5楼2013-03-13 13:29:28
6楼2013-03-13 14:35:19
7楼2013-03-13 14:38:30
8楼2013-03-13 14:41:49
11楼2013-03-14 17:22:56
12楼2013-03-15 13:00:57
14楼2013-03-31 21:47:09
15楼2013-04-01 15:18:45
16楼2013-04-01 21:26:04
17楼2013-04-02 16:04:29
18楼2013-04-02 16:43:41
19楼2013-04-02 22:29:57
20楼2013-05-06 23:23:47
21楼2014-10-28 20:39:48
22楼2014-10-28 20:41:29
23楼2014-10-29 08:50:13
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
| 其实这个问题归根结底就是：瞬时转染和稳定转染的区别，瞬时转染的目的是得到少量的一些蛋白实验一下，如果蛋白可用而且需要大量生产的话，就要进行稳定转染筛选稳定细胞株，只要筛选稳定细胞株，直接培养这个细胞株就可以方便容易的得到大量的蛋白，因为瞬转不能满足大量生产的需求，培养1L细胞需要1mg质粒只能得到1mg蛋白，如果需要1g 2g甚至更大量的蛋白，那要多少质粒才能满足需求，那样光合成质粒就要花几百万，所以只能筛选稳定细胞株才能解决这个问题，如果知道瞬转和稳转的原理也就明白这个意思了，瞬时转染表达质粒基因组不整合到细胞自身基因组上随着细胞的生长分裂3-4天质粒基因就会丢失，这时候收集细胞，只能得到很少量的质粒表达的蛋白，而稳定转染是吧外源基因直接整合到细胞基因组上，经过一系列的抗性筛选最终得到能够稳定表达的细胞株，这就是稳定转染 |
24楼2015-10-29 15:00:54
简单回复
yingying158810楼
2013-03-13 19:55
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
haixiawu13楼
2013-03-19 05:53
