| 查看: 8449 | 回复: 23 | |||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[交流]
细胞瞬时转染和质粒复制
|
|||||
|
大家好！ 我有个问题 最近在做细胞转染，用的是293细胞和pcDNA3.1质粒。 我想问的是，质粒会在细胞中复制么？ 如果质粒在细胞中复制，为什么又要筛选做稳定株？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有182人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- RNA干扰实验是直接转染RNA还是转染表达该RNA的质粒？
已经有7人回复
- 质粒在细胞内能存在多久
已经有9人回复
- pEGFP重组载体转染细胞不发光，空载体发光，这是啥原因啊，急
已经有12人回复
- 瞬转中，质粒在细胞里会复制吗？
已经有6人回复
- PCR扩增法制备低拷贝质粒（替代常规质粒提取）
已经有11人回复
- 细胞稳定转染，质粒的设计
已经有15人回复
- 求一段英译汉，在线翻译器的请绕道哦
已经有6人回复
- 悬浮细胞转染
已经有28人回复
- 如何判断转染的细胞表达了自己想要的蛋白
已经有3人回复
- 请大家看看这个eGFP真核载体，为什么转染Sp2/0后看不到荧光？
已经有5人回复
- 【求助/交流】我想问下瞬时转染和稳定转染。。。
已经有8人回复
- 【求助/交流】求助：Western检测转染质粒在细胞内的表达
已经有4人回复
- 【求助/交流】请问转染了GFP的肿瘤细胞？
已经有8人回复
- 【分享】推荐一款性能最实用的转染试剂
已经有14人回复
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24339.7
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
★ ★ ★ ★ ★ ★
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 热心的斑斑 2013-03-13 16:31:57
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 热心的斑斑 2013-03-13 16:31:57
|
293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞，表达转染的腺病毒5的基因。 293T细胞表达 E1A蛋白和SV40大T抗原，因此含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以在其中复制。 你最近在做细胞转染，用的是293细胞和pcDNA3.1质粒，因为293细胞不含有SV40大T抗原，因此即使pcDNA3.1质粒含有SV40 ori，pcDNA3.1也不能在293细胞中复制，如果你转染的是293T细胞，那么pcDNA3.1 就可在其中复制了。 至于为什么又要筛选做稳定株，是因为质粒转染进293细胞作为episome的形式存在，不能复制，随着细胞的分裂，质粒会被随机分配到其两子代细胞中发生稀释至最终丢失。而筛选出来的稳定株，此时的质粒已经被整合进宿主染色体，随着宿主基因组DNA的复制而一起复制，并稳定遗传给子代。 |
9楼2013-03-13 15:00:13
2楼2013-03-13 11:22:42
★
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
3楼2013-03-13 11:25:54
4楼2013-03-13 13:28:02