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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 细胞瞬时转染和质粒复制
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wsmcc

金虫 (小有名气)

[交流] 细胞瞬时转染和质粒复制

大家好！
我有个问题
最近在做细胞转染，用的是293细胞和pcDNA3.1质粒。
我想问的是，质粒会在细胞中复制么？

如果质粒在细胞中复制，为什么又要筛选做稳定株？
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1楼2013-03-13 10:42:56
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 热心的斑斑 2013-03-13 16:31:57
引用回帖:
5楼: Originally posted by wsmcc at 2013-03-13 13:29:28
可是，我看到论坛里有人说，有SV40和T抗原就可以，可是如果有的话，又为何要做稳定株筛选？穿梭质粒的定义里面，有可以复制这一说呀...

293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞，表达转染的腺病毒5的基因。

293T细胞表达 E1A蛋白和SV40大T抗原，因此含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以在其中复制。

你最近在做细胞转染，用的是293细胞和pcDNA3.1质粒，因为293细胞不含有SV40大T抗原，因此即使pcDNA3.1质粒含有SV40 ori，pcDNA3.1也不能在293细胞中复制，如果你转染的是293T细胞，那么pcDNA3.1 就可在其中复制了。

至于为什么又要筛选做稳定株，是因为质粒转染进293细胞作为episome的形式存在，不能复制，随着细胞的分裂，质粒会被随机分配到其两子代细胞中发生稀释至最终丢失。而筛选出来的稳定株，此时的质粒已经被整合进宿主染色体，随着宿主基因组DNA的复制而一起复制，并稳定遗传给子代。
赞一下(3人) 回复此楼
9楼2013-03-13 15:00:13
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lidonghong

金虫 (正式写手)
★
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
这个嘛，说说我的理解，一开始转染进去时可以复制的，但是随着培养的时间的延长，细胞发现这个质粒不是本身的东西所以就清除掉了。。。。
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2楼2013-03-13 11:22:42
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
http://www.dxy.cn/bbs/topic/11879975
http://www.dxy.cn/bbs/topic/11626894
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-03-13 11:25:54
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wsmcc

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by userhung at 2013-03-13 11:25:54
http://www.dxy.cn/bbs/topic/11879975
http://www.dxy.cn/bbs/topic/11626894

我看了您的链接，貌似没有相关性……
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4楼2013-03-13 13:28:02
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