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wsmcc(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 热心的斑斑 2013-03-13 16:31:57
引用回帖:
5楼: Originally posted by wsmcc at 2013-03-13 13:29:28
可是,我看到论坛里有人说,有SV40和T抗原就可以,可是如果有的话,又为何要做稳定株筛选?穿梭质粒的定义里面,有可以复制这一说呀...

293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞,表达转染的腺病毒5的基因。

293T细胞表达 E1A蛋白和SV40大T抗原,因此含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以在其中复制。

你最近在做细胞转染,用的是293细胞和pcDNA3.1质粒,因为293细胞不含有SV40大T抗原,因此即使pcDNA3.1质粒含有SV40 ori,pcDNA3.1也不能在293细胞中复制,如果你转染的是293T细胞,那么pcDNA3.1 就可在其中复制了。

至于为什么又要筛选做稳定株,是因为质粒转染进293细胞作为episome的形式存在,不能复制,随着细胞的分裂,质粒会被随机分配到其两子代细胞中发生稀释至最终丢失。而筛选出来的稳定株,此时的质粒已经被整合进宿主染色体,随着宿主基因组DNA的复制而一起复制,并稳定遗传给子代。
9楼2013-03-13 15:00:13
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