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wsmcc

金虫 (小有名气)

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[交流] 细胞瞬时转染和质粒复制

大家好！
我有个问题
最近在做细胞转染，用的是293细胞和pcDNA3.1质粒。
我想问的是，质粒会在细胞中复制么？

如果质粒在细胞中复制，为什么又要筛选做稳定株？

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1楼 2013-03-13 10:42:56

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
wsmcc(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 热心的斑斑 2013-03-13 16:31:57

引用回帖:

5楼: Originally posted by wsmcc at 2013-03-13 13:29:28
可是，我看到论坛里有人说，有SV40和T抗原就可以，可是如果有的话，又为何要做稳定株筛选？穿梭质粒的定义里面，有可以复制这一说呀...

293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞，表达转染的腺病毒5的基因。

293T细胞表达 E1A蛋白和SV40大T抗原，因此含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以在其中复制。

你最近在做细胞转染，用的是293细胞和pcDNA3.1质粒，因为293细胞不含有SV40大T抗原，因此即使pcDNA3.1质粒含有SV40 ori，pcDNA3.1也不能在293细胞中复制，如果你转染的是293T细胞，那么pcDNA3.1 就可在其中复制了。

至于为什么又要筛选做稳定株，是因为质粒转染进293细胞作为episome的形式存在，不能复制，随着细胞的分裂，质粒会被随机分配到其两子代细胞中发生稀释至最终丢失。而筛选出来的稳定株，此时的质粒已经被整合进宿主染色体，随着宿主基因组DNA的复制而一起复制，并稳定遗传给子代。

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