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lydia320

新虫 (初入文坛)

[求助] 瞬转中，质粒在细胞里会复制吗？

在瞬时转染中，转染到细胞中的质粒会随着细胞的增值而复制增多吗？转染多久之后质粒可能会降解啊？检测质粒表达的蛋白，在转染后多久给药刺激质粒转录，多久后是蛋白表达的高峰呢？请各位高人多多指教啊！
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分子生物学 质粒提取

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1楼 2012-04-11 09:53:05
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lydia320: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-04-11 22:56:28
转细胞的质粒是不会复制的，真核生物没有这种机制，只有整合到基因组的才会随着细胞增殖而复制。瞬时转染能维持一周就不错了。
蛋白表达嘛，要看细胞和质粒而定了。一般情况下转染24～48h后检测会比较好。楼主参考文献确定这个时间点吧。
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2楼2012-04-11 16:40:03
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
需要一段时间。。。质粒虽然可以进行高效复制，但是需要一段培养时间，另外也取决于宿主的生长状况了。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2012-04-11 19:05:25
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ding_xiao
4楼2012-04-11 19:22:46
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒复制与否取决于你用的瞬转系统。
有两个高表达的瞬转系统是能够保证质粒复制的：
基于SV40病毒大T抗原的复制系统，如：HEK293T + 含SV40复制原点的质粒系统
基于EBV病毒EBNA1蛋白的复制系统，如：HEK293E+含EBV复制原点的质粒系统

其他的瞬转系统应该是不能复制，因而表达量低
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lydia320
5楼2012-04-11 21:05:22
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lydia320

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-04-11 21:05:22:
质粒复制与否取决于你用的瞬转系统。
有两个高表达的瞬转系统是能够保证质粒复制的：
基于SV40病毒大T抗原的复制系统，如：HEK293T + 含SV40复制原点的质粒系统
基于EBV病毒EBNA1蛋白的复制系统，如：HEK293E+ ...

我以前用的是293T，表达的很好，换了HUVEC就不行了，是不是就是这个原因啊……如果表达量低要怎么办呢？
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6楼2012-04-11 23:01:58
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
质粒当然不会复制啊，瞬时表达，瞬转质粒导入细胞后，基因不整合到细胞自身染色体上，因此会随着细胞的生长分裂，质粒会逐渐丢失，只有进行稳定转染的时候，质粒基因才能整合的细胞染色体上
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-09-08 09:37:06
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