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lydia320

新虫 (初入文坛)

[求助] 瞬转中,质粒在细胞里会复制吗?

在瞬时转染中,转染到细胞中的质粒会随着细胞的增值而复制增多吗?转染多久之后质粒可能会降解啊?检测质粒表达的蛋白,在转染后多久给药刺激质粒转录,多久后是蛋白表达的高峰呢?请各位高人多多指教啊!
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lydia320: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-04-11 22:56:28
转细胞的质粒是不会复制的,真核生物没有这种机制,只有整合到基因组的才会随着细胞增殖而复制。瞬时转染能维持一周就不错了。
蛋白表达嘛,要看细胞和质粒而定了。一般情况下转染24~48h后检测会比较好。楼主参考文献确定这个时间点吧。
2楼2012-04-11 16:40:03
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
需要一段时间。。。质粒虽然可以进行高效复制,但是需要一段培养时间,另外也取决于宿主的生长状况了。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2012-04-11 19:05:25
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4楼2012-04-11 19:22:46
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒复制与否取决于你用的瞬转系统。
有两个高表达的瞬转系统是能够保证质粒复制的:
基于SV40病毒大T抗原的复制系统,如:HEK293T + 含SV40复制原点的质粒系统
基于EBV病毒EBNA1蛋白的复制系统,如:HEK293E+含EBV复制原点的质粒系统

其他的瞬转系统应该是不能复制,因而表达量低

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2012-04-11 21:05:22
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lydia320

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-04-11 21:05:22:
质粒复制与否取决于你用的瞬转系统。
有两个高表达的瞬转系统是能够保证质粒复制的:
基于SV40病毒大T抗原的复制系统,如:HEK293T + 含SV40复制原点的质粒系统
基于EBV病毒EBNA1蛋白的复制系统,如:HEK293E+ ...

我以前用的是293T,表达的很好,换了HUVEC就不行了,是不是就是这个原因啊……如果表达量低要怎么办呢?
6楼2012-04-11 23:01:58
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

质粒当然不会复制啊,瞬时表达,瞬转质粒导入细胞后,基因不整合到细胞自身染色体上,因此会随着细胞的生长分裂,质粒会逐渐丢失,只有进行稳定转染的时候,质粒基因才能整合的细胞染色体上
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-09-08 09:37:06
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