24小时热门版块排行榜    

查看: 9134  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lydia320

新虫 (初入文坛)

[求助] 瞬转中,质粒在细胞里会复制吗?

在瞬时转染中,转染到细胞中的质粒会随着细胞的增值而复制增多吗?转染多久之后质粒可能会降解啊?检测质粒表达的蛋白,在转染后多久给药刺激质粒转录,多久后是蛋白表达的高峰呢?请各位高人多多指教啊!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
需要一段时间。。。质粒虽然可以进行高效复制,但是需要一段培养时间,另外也取决于宿主的生长状况了。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2012-04-11 19:05:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lydia320: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-04-11 22:56:28
转细胞的质粒是不会复制的,真核生物没有这种机制,只有整合到基因组的才会随着细胞增殖而复制。瞬时转染能维持一周就不错了。
蛋白表达嘛,要看细胞和质粒而定了。一般情况下转染24~48h后检测会比较好。楼主参考文献确定这个时间点吧。
2楼2012-04-11 16:40:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒复制与否取决于你用的瞬转系统。
有两个高表达的瞬转系统是能够保证质粒复制的:
基于SV40病毒大T抗原的复制系统,如:HEK293T + 含SV40复制原点的质粒系统
基于EBV病毒EBNA1蛋白的复制系统,如:HEK293E+含EBV复制原点的质粒系统

其他的瞬转系统应该是不能复制,因而表达量低

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2012-04-11 21:05:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lydia320

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-04-11 21:05:22:
质粒复制与否取决于你用的瞬转系统。
有两个高表达的瞬转系统是能够保证质粒复制的:
基于SV40病毒大T抗原的复制系统,如:HEK293T + 含SV40复制原点的质粒系统
基于EBV病毒EBNA1蛋白的复制系统,如:HEK293E+ ...

我以前用的是293T,表达的很好,换了HUVEC就不行了,是不是就是这个原因啊……如果表达量低要怎么办呢?
6楼2012-04-11 23:01:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 8/400 2026-08-25 05:12 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见