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金虫 (小有名气)

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[交流] 细胞瞬时转染和质粒复制

大家好！
我有个问题
最近在做细胞转染，用的是293细胞和pcDNA3.1质粒。
我想问的是，质粒会在细胞中复制么？

如果质粒在细胞中复制，为什么又要筛选做稳定株？

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1楼 2013-03-13 10:42:56

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

古月问你哦

铜虫 (小有名气)

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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

其实这个问题归根结底就是：瞬时转染和稳定转染的区别，瞬时转染的目的是得到少量的一些蛋白实验一下，如果蛋白可用而且需要大量生产的话，就要进行稳定转染筛选稳定细胞株，只要筛选稳定细胞株，直接培养这个细胞株就可以方便容易的得到大量的蛋白，因为瞬转不能满足大量生产的需求，培养1L细胞需要1mg质粒只能得到1mg蛋白，如果需要1g 2g甚至更大量的蛋白，那要多少质粒才能满足需求，那样光合成质粒就要花几百万，所以只能筛选稳定细胞株才能解决这个问题，如果知道瞬转和稳转的原理也就明白这个意思了，瞬时转染表达质粒基因组不整合到细胞自身基因组上随着细胞的生长分裂3-4天质粒基因就会丢失，这时候收集细胞，只能得到很少量的质粒表达的蛋白，而稳定转染是吧外源基因直接整合到细胞基因组上，经过一系列的抗性筛选最终得到能够稳定表达的细胞株，这就是稳定转染