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guyue900905新虫 (初入文坛)
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[求助]
什么样地结果算是pcr后p出来了，谢谢~~~~~
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| 我提取的动物肌肉组织rna，od值略大，但是师姐说只要PCR能P出来就可以了。我想问一下各位高手，什么样算是P出来了啊？谢谢。顺便问一下普通pcr的条件和实时荧光定量pcr条件一样么？谢谢 |
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7楼2013-03-07 23:24:48
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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首先，如果OD值偏大，PCR的时候有可能是扩的是基因组的片段，所以设计引物的时候最好是跨着内含子设计，这样估计就像你师姐说的，PCR能P出来就可以了； 其次，能P出来的就是说除了引物二聚体的条带外，你所扩增的目的片段的大小，跟你设计引物时的片段大小基本相同，不能太大也不能太小，否则很可能是非特异性扩增或者其他的情况，这种得到的片段一般都不是你想要的； 最后，实时荧光定量的条件一般是固定的，跟荧光定量的试剂有关，一般与普通PCR的条件是不一样的，荧光定量的条件在试剂说明书上都有，包括PCR的组分和各阶段的反应时间，基本按照那个上面的做就没有问题 做荧光定量的实验，最好是把RNA提的质量高一点，这样后期做也比较顺畅，其实不是很难，入门以后就简单了，好好做，加油！  |
2楼2013-03-05 11:03:56
yesali
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3楼2013-03-05 12:08:22
guyue900905
新虫 (初入文坛)
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4楼2013-03-05 15:27:56
