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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助基因克隆指导！
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su5five

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助基因克隆指导！

各位高手：
         我是一个新手，现在有一个基因需要克隆，目前的状况是：这个基因在我需要克隆物种的同源性相近的物种上面已经克隆出来。我只需要这个基因的部分DNA序列，请问我该怎样操作？用什么样的方法？实验需要哪些药品？越详细越好！万分感谢！金币有限。。。
      

       toll样受体基因 实验对象虾！
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1楼 2013-02-26 12:53:06
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peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你这是有什么特殊需要，设计一对引物把你要的序列p出来不就可以了么？
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2楼2013-02-26 16:50:44
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wangcaijuan

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先你应该问问同门师兄姐，你们实验室用的基因克隆是什么手段。不同方法步骤是完全不一样的。我也是个新手，我先把我用过的gateway方法的步骤说一下吧。
1，先决定需要的目的片段，然后在上下游设计含attB-位点的引物。
2，PCR扩增目的片段并电泳割胶回收提纯目的基因。
3，BP反应将目的基因转入载体质粒，转化大肠杆菌。
4，筛选阳性克隆，先电泳比对质粒大小，然后测序确定目的基因是否正确插入质粒载体。
5，再进行LR反应，将目的基因转入Destinationz质粒载体，同样筛选阳性克隆，测序确定基因是否正确。
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3楼2013-02-26 18:29:37
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