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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于DNA连接的问题
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1066479423

银虫 (小有名气)

[求助] 关于DNA连接的问题

现在有两段约23bp的双链DNA片段，要把他们连接成一段约60bp的双链DNA，应该用什么方法，各种试剂使用多少的量？连接完以后用什么方法纯化一下，然后要和质粒载体连接？ 非常感谢
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1楼 2013-01-25 20:28:58
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1066479423: 金币+3 2013-01-27 13:04:42
用PCR连起来 你现在序列没有重叠部分的话 重新订引物吧。
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2楼2013-01-25 22:15:36
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
也可以设计两段包含目标序列的长引物，在末端放BsaI酶切位点，直接PCR载体后， 酶切连接
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3楼2013-01-25 22:19:07
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两段合起来才60bp，那不如直接去合成好了，当成引物合成的话，一个bp才一块多。。
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学习中
4楼2013-01-26 14:04:28
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1066479423

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by WilliamHJ at 2013-01-26 14:04:28
两段合起来才60bp，那不如直接去合成好了，当成引物合成的话，一个bp才一块多。。

谢谢，不过已经合成好了，只能这样做了
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5楼2013-01-26 16:47:20
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1066479423

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-01-25 22:15:36
用PCR连起来 你现在序列没有重叠部分的话 重新订引物吧。

PCR连接和序列没有重叠部分  什么意思？不太懂您说的，刚开始做实验，很多都不懂，还望指教。非常感谢
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6楼2013-01-26 16:50:24
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1066479423

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-01-25 22:19:07
也可以设计两段包含目标序列的长引物，在末端放BsaI酶切位点，直接PCR载体后， 酶切连接

嗯，谢谢，已经合成好了
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7楼2013-01-26 16:51:52
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