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1066479423

银虫 (小有名气)

[求助] 关于DNA连接的问题

现在有两段约23bp的双链DNA片段,要把他们连接成一段约60bp的双链DNA,应该用什么方法,各种试剂使用多少的量?连接完以后用什么方法纯化一下,然后要和质粒载体连接? 非常感谢
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1066479423: 金币+3 2013-01-27 13:04:42
用PCR连起来 你现在序列没有重叠部分的话 重新订引物吧。
2楼2013-01-25 22:15:36
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

也可以设计两段包含目标序列的长引物,在末端放BsaI酶切位点,直接PCR载体后, 酶切连接
3楼2013-01-25 22:19:07
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
两段合起来才60bp,那不如直接去合成好了,当成引物合成的话,一个bp才一块多。。
学习中
4楼2013-01-26 14:04:28
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1066479423

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by WilliamHJ at 2013-01-26 14:04:28
两段合起来才60bp,那不如直接去合成好了,当成引物合成的话,一个bp才一块多。。

谢谢,不过已经合成好了,只能这样做了
5楼2013-01-26 16:47:20
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1066479423

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-01-25 22:15:36
用PCR连起来 你现在序列没有重叠部分的话 重新订引物吧。

PCR连接和序列没有重叠部分  什么意思?不太懂您说的,刚开始做实验,很多都不懂,还望指教。非常感谢
6楼2013-01-26 16:50:24
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1066479423

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-01-25 22:19:07
也可以设计两段包含目标序列的长引物,在末端放BsaI酶切位点,直接PCR载体后, 酶切连接

嗯,谢谢,已经合成好了
7楼2013-01-26 16:51:52
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