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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 寻找荧光定量的问题出在哪里？
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cnb1987

银虫 (小有名气)

[求助] 寻找荧光定量的问题出在哪里？

今天做了荧光定量，现在不知道问题出在哪里了，请各位同僚帮我分析一下。下面是溶解曲线和扩增曲线。我该肿么办！

DSC00204.JPG



DSC00205.JPG
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1楼 2013-01-15 15:09:02
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nuowei36

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

保证操作没问题吧，你是每个样品都做3个重复吗？换把好枪再做做，怎么线飞得到处都是。
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2楼2013-02-20 19:09:25
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
cnb1987: 金币+2, ★有帮助 2013-03-06 13:51:30
会不会体系被污染了，还有楼主的引物特异性怎么样，可以试着从这些方面寻找原因的
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风雪夜归人
3楼2013-02-20 21:54:57
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lebron921

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
cnb1987: 金币+2, ★有帮助 2013-03-06 13:51:56
引物特性太差了，扩增产物长度控制在100bp左右，设计完跑琼脂糖检测，目标长度下单一条带无引物二聚体最佳~~~希望有帮助
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4楼2013-02-21 00:08:29
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phhcrab

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
cnb1987: 金币+2, ★有帮助 2013-03-06 13:52:17
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-06 17:13:53
要把你的实验和样本背景说一下，比如哪些是重复？就这样放两张图，难说是什么问题。
不过我看你有些只有引物二聚体的峰，估计引物也有问题。有时候样本提取的质量也会有影响的。建议问问题的时候描述得详细一点。
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5楼2013-02-21 13:13:18
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xuejia174

禁虫 (小有名气)
★ ★
cnb1987: 金币+2, ★有帮助 2013-03-06 13:52:25
本帖内容被屏蔽
6楼2013-02-21 13:24:52
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Elainebear

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

考虑是不是体系污染和引物的问题
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7楼2013-02-24 13:37:44
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田月珍

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是严重的污染，把所有要用的药品及试剂分装，用一次扔掉
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8楼2013-03-01 18:46:39
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cnb1987

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wqj1988926 at 2013-02-20 21:54:57
会不会体系被污染了，还有楼主的引物特异性怎么样，可以试着从这些方面寻找原因的

这个引物以前用过，现在换了不同的cDNA模版，做出来效果是这个，我感觉应该是模版的问题。
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9楼2013-03-06 13:51:24
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cnb1987

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xuejia174 at 2013-02-21 13:24:52
我认为是加样或者是模板的问题

模版的问题吧！
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10楼2013-03-06 13:52:37
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