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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] 克隆基因点突变如何解决

克隆基因连接T载体后测序,有点突变,应该从哪里改进?????
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果序列不长的话用taq没问题,再挑几个克隆去测序。不行的话重做PCR,循环数不要多。大片段用高保真酶做,P好后加A,再做TA克隆。
3楼2012-12-17 09:31:20
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shujunru

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你重新做一遍PCR,使用高保真酶,注意说明书,象pfu是不能在扩增结束时加A的,不能做T载体连接;
2楼2012-12-17 06:22:03
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-17 09:31:20
如果序列不长的话用taq没问题,再挑几个克隆去测序。不行的话重做PCR,循环数不要多。大片段用高保真酶做,P好后加A,再做TA克隆。

循环30个算多吗?
4楼2012-12-17 09:50:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by yuguiyan at 2012-12-17 09:50:00
循环30个算多吗?...

不算多,如果扩增效率不错的话可以用25个。
5楼2012-12-17 13:06:30
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