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applexixixi

木虫 (小有名气)

[求助] IPTG诱导表达的问题

各位朋友,有谁做过大肠杆菌的IPTG诱导表达?我有一些问题想咨询一下。
1,是不是一定要把大肠培养到对数期再加IPTG诱导?具体OD值是多少有明确要求吗?
2,我的表达质粒是pUC18加了我的目的基因,不同质粒对IPTG诱导表达有什么影响吗?我看文献用pET系列的很多,这个区别大吗?
3,要表达不同的目的基因,诱导的具体条件是不是不同呢?都需要做哪些条件的优化?比如菌的OD值,IPTG浓度,诱导时间都需要做吗?
哪位朋友有现成的实验方案最好了,希望能分享一下。
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小冀-

版主 (著名写手)

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引用回帖:
8楼: Originally posted by karlgu18 at 2012-12-18 17:09:16
大肠杆菌诱导表达分成两个阶段:培养和诱导
(1) 培养
接种,30℃培养,待OD600nm=2-3,或者1-2时进行诱导。接种量千分之五。培养时间7-8h或者5-6h。
(2)诱导
30℃诱导,即下班前或者17点左右诱导。诱导是overn ...

我用IPTG诱导时终浓度是0.5mM,30℃诱导6h,在SDS蛋白电泳中,破碎沉淀中有目的蛋白条带,而且很亮,这是不是说明表达的蛋白是以包涵体的形式存在?如果是的话,该如何确定最佳的IPTG浓度呢?是从0.1-0.5mM依次做摇瓶,然后跑SDS吗?
···
12楼2014-10-22 21:48:42
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