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连接表达载体后的检测问题
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最近一直在做酶切，连接，以及检测 但是发现一些问题，想咨询大家，最近结果如下： 1. 酶切后连接，这部分做的比较稳定，长斑情况虽不是特别多，只有那么几个 2.将长好的斑摇菌后，提质粒，质粒PCR，都有合适的条带 3.不加模板，PCR的结果很郁闷，一共4个基因，1号基因扩出来了，2,3,4，没有 4.将空载体作为模板，PCR的结果：1,2,3,4都有条带，但2的条带比目的条带偏小，3比目的条带偏大，1和4的条带看着和目的条带大小一样。 现在的问题是：不明白为什么空载体能扩出来东西？如果说我的引物污染了，那不加模板也应该是能扩出来东西的；用的是生工买的PCR mix 现在这些结果真是让人郁闷，希望大家帮忙分析一下这个情况该如何 是不是得重新开始？ 谢谢 |
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