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蛋白之家

新虫 (小有名气)

[求助] 表达载体的问题 和表达载体连接后的检测问题

为什么连表达载体后挑斑,结果菌液PCR没有东西,提质粒基本上都有 但是提的质粒条带很奇怪,请大家帮忙分析一下,见图
本来连好的载体应该是6000左右的条带,可是现在提的质粒有1500左右的一条带,另外一条是10000以上的条带,能不能帮忙分析一下原因   谢谢

9.1质粒检测.JPG.JPG
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 专家考核, 辛苦了 2012-09-04 13:39:58
有杂带很正常啊。。。
PCR都没有P出来,应该不对;
现在质粒大小有问题,你酶切一下,因为跑出来的条带都是超螺旋状态,肯定小了。。。而你的质粒是6k,是线性的。。。
酶切如果不对。。。冲刺呢连接吧!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2012-09-03 23:03:42
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蛋白之家

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 天使托 at 2012-09-03 23:03:42
有杂带很正常啊。。。
PCR都没有P出来,应该不对;
现在质粒大小有问题,你酶切一下,因为跑出来的条带都是超螺旋状态,肯定小了。。。而你的质粒是6k,是线性的。。。
酶切如果不对。。。冲刺呢连接吧!

谢谢
3楼2012-09-04 08:53:29
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我目前也遇到了楼主这样的问题,连接后应该是6300的载体,结果跑质粒跑出两根条带,一根4500,一根2000多点,没道理一根是载体,一根是目的片段吧……
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-09-04 08:56:05
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