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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 表达载体的问题 和表达载体连接后的检测问题
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蛋白之家

新虫 (小有名气)

[求助] 表达载体的问题 和表达载体连接后的检测问题

为什么连表达载体后挑斑，结果菌液PCR没有东西，提质粒基本上都有 但是提的质粒条带很奇怪，请大家帮忙分析一下，见图
本来连好的载体应该是6000左右的条带，可是现在提的质粒有1500左右的一条带，另外一条是10000以上的条带，能不能帮忙分析一下原因   谢谢

9.1质粒检测.JPG.JPG
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1楼 2012-09-03 16:46:29
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 专家考核, 辛苦了 2012-09-04 13:39:58
有杂带很正常啊。。。
PCR都没有P出来，应该不对；
现在质粒大小有问题，你酶切一下，因为跑出来的条带都是超螺旋状态，肯定小了。。。而你的质粒是6k,是线性的。。。
酶切如果不对。。。冲刺呢连接吧！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2012-09-03 23:03:42
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蛋白之家

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 天使托 at 2012-09-03 23:03:42
有杂带很正常啊。。。
PCR都没有P出来，应该不对；
现在质粒大小有问题，你酶切一下，因为跑出来的条带都是超螺旋状态，肯定小了。。。而你的质粒是6k,是线性的。。。
酶切如果不对。。。冲刺呢连接吧！

谢谢
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3楼2012-09-04 08:53:29
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我目前也遇到了楼主这样的问题，连接后应该是6300的载体，结果跑质粒跑出两根条带，一根4500，一根2000多点，没道理一根是载体，一根是目的片段吧……
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-09-04 08:56:05
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