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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因组PCR 无结果
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woo_edison

银虫 (小有名气)

[求助] 基因组PCR 无结果

以前提基因组DNA做pcr都work，但最近怎么着也不work了，即使用的以前验证了的引物，我以前的模板作为对照就可以P到东西，这貌似是说我目前的基因组DNA不好，于是我对基因组进行了评估：基因组DNA跑胶只有一条带，nanodrop测试OD260/280=1.9-2.0 OD260/230=2.5。貌似还可以，但为何PCR无结果呢。在此基础上我对模板进行了稀释1/10,1/100和1/1000，还是不能P到东西?请各位高手指点迷津
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1楼 2012-11-29 12:15:27
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
woo_edison: 金币+1 2012-11-30 07:53:43
跑胶一条带的话说明没有RNA污染了，虽然260/280有点高。你nanodrop后DNA的浓度多少？PCR模板一般原核生物基因组用10ng，真核用100ng左右。
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2楼2012-11-30 07:17:10
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woo_edison

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-30 07:17:10
跑胶一条带的话说明没有RNA污染了，虽然260/280有点高。你nanodrop后DNA的浓度多少？PCR模板一般原核生物基因组用10ng，真核用100ng左右。

用nanodrop测浓度时，是否要稀释呢?
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3楼2012-11-30 07:53:35
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woo_edison

银虫 (小有名气)
是酶出问题了
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4楼2012-12-01 04:57:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by woo_edison at 2012-11-30 07:53:35
用nanodrop测浓度时，是否要稀释呢?...

一般直接测不用稀释，除非样品浓度非常高。
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5楼2012-12-01 07:57:24
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