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12101008

铜虫 (小有名气)

[交流] 提取植物RNA的实验过程需要注意哪些细节? 已有3人参与

最近偶尔在题RNA,但用试剂盒提的质量总是不好,最近导师给买了RNA提取试剂,目前还没用不知道效果如何。大家都来讨论一下,提取RNA的过程中要注意哪些细节,才能让提取的RNA质量更好。
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-11-24 13:45:33
1 避免RNA污染
2 有些植物材料含多酚多糖,影响提取,常规Trizol法提不出来,这就需要考虑使用幼嫩植物组织,添加2-巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)或半胱氨酸防止酚氧化(但一般效果并不会太理想),添加pvp结合酚;对于多糖,可以通过LiCl沉淀RNA将部分多糖留在上清液中;此外,有些莫名其妙的此生代谢产物也会影响RNA提取,针对这个目前没有办法。有很多市售的试剂盒号称适用于植物RNA提取,但很多时候也未必好用。如果资金宽裕,可以多买几种试剂盒试试,否则从基本方法入手,如果遇到问题,再逐渐优化方法。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2012-11-24 00:42:57
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hch123

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-11-24 13:45:48
我觉得
1.实验器材和试剂要保证是无酶的。
2.研磨尽量湿磨,当然也没那么严格。
3.吸上清宁愿少吸点,以免吸到杂质,。
4.最后加水溶解前的晾干时间不要太长。
5.整个实验过程要勤换手套。
暂时就想到这么多,求高手补充!
脚踏实地:遇一个,学一个,会一个。。。
3楼2012-11-24 11:59:08
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匿名

用户注销 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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4楼2012-11-24 12:56:02
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12101008

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 大-木-虫 at 2012-11-24 12:56:02
就是在研磨和转移的时候损失比较大,这里注意就行了,其他时候基本都是在化学试剂中存在的,不会降解太多,溶解的时候用好点的水,直接买生物公司处理好的就行了

上次我们老板带我提RNA,我看着研磨的过程确实跟我做的不太一样。
5楼2012-11-24 19:32:48
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