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today521328

新虫 (初入文坛)

[求助] 目的基因的连接与转化

求助:目的基因与质粒连接后4℃冰箱可以放多久,我已经放了一天多了,感受态细胞还没到,想问下连接体系是不是会有问题。还有 转化后的感受态放4℃能放多久啊!转化后在4℃放两三天应该可以用吧!谢谢
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drxiao2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
today521328: 金币+3, ★★★很有帮助, 回答的很好,谢谢!以后经常交流 2012-11-23 09:46:18
连接4℃1天后可放-20℃,应该没问题。
热激后,感受态细胞最好37或28℃摇一阵恢复一下活力。再放4℃ 2~3天,也问题不大。
3楼2012-11-22 15:44:56
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看不大懂你的操作步骤,连接过后放4度一段时间不要紧,一段时间指一两天,如果短时间内不转化放-20度冻着吧

转化过后还放4度?转化之后,也就是热激后复苏一下直接涂板了,不能放4度,菌被冻死了,本来感受态细胞就能脆弱。

或者我没有理解你的问题,不知道你是不是指转化的时候孵育温度和时间?
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-11-22 14:44:50
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q7111988

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
today521328: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢!帮大忙了,我的目的基因与载体已经连接了三天了,定的感受态细胞还没到,怕连接体系有问题,看到你的回答,方向你多了。我16℃连接1-2小时,然后放在4℃已经3天了,应该没事吧!谢谢! 2012-11-23 09:49:47
我们做连接时放到16度,一直放上个3、4天都没问题。转化后的感受态就该直接加LB-液体培养基培养了,培养后的菌液就不算是感受态了,而是可能含有转化质粒的菌了,然后涂板倒置过夜培养就行了,若是大肠杆菌是37度培养,若是农杆菌则是28度,不需要放4度啊。
Life is a pure flame, and we live by an invisible sun within us.
4楼2012-11-22 16:12:55
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