| 查看: 1681 | 回复: 3 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
liyanying06新虫 (初入文坛)
|
[交流]
有人找公司合成过目的基因吗已有2人参与
|
|||
|
我打算在目的基因上下游设计酶切位点，然后找公司合成。公司为我提供的是一份4ul的质粒和穿刺菌。如何将质粒上的目的基因克隆到我的表达载体上呢？ 我有三个方案： （1）将克隆载体和表达载体的混合体系一起进行双酶切； （2)先将载体双酶切，然后电泳回收目的基因，再克隆到表达载体上。 （3）PCR扩增目的基因，双酶切克隆到表达载体上。 请问哪种方法比较好一点？ 我刚开始做分子生物学，很多东西都不懂，希望有好心人帮助。在这里先谢谢大家啦。 |
回复此楼» 收录本帖的淘贴专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
阴阳离子交换剂！！！！
已经有3人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有11人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有109人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有10人回复
-
酸酐或者羧酸酰氯化
已经有15人回复
-
酚羟基接入磷酸，磷酸酯化
已经有26人回复
-
土壤中可溶性有机碳种类
已经有1人回复
-
韩国海关检测食用植物油中的苯并芘用的是哪种方法？
已经有0人回复
-
现有pP43NMK质粒，想换了pHT43，或者其他芽孢杆菌过表达质粒
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 合成专业回湖南有什么公司好推荐？
已经有10人回复
- 天津有机合成公司哪里比较不错（硕士）
已经有7人回复
- 请问大家基因合成的话都是让那些公司做的？
已经有22人回复
- 广州有机合成方面的公司
已经有25人回复
- 求助全基因合成
已经有17人回复
- 大侠知道从哪家公司可以买到基因吗？
已经有8人回复
- 有人做过人工microRNA以使目标基因沉默吗？求助~~
已经有5人回复
- 请问有机合成的博士去药企或外包公司工作每天还自己亲自做实验吗？
已经有25人回复
yabxxh
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 14
- 应助: 22 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 2238
- 散金: 98
- 红花: 9
- 帖子: 456
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 157001
- 注册: 2006-01-05
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-05-14 15:27:16
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-05-14 15:27:16
|
...，你这个还是要补一下基础知识了，这个其实还是挺简单的。 首先，既然有穿刺菌，我觉得还是应该去摇个菌，提一下质粒，提完质粒之后做一个双酶切鉴定，然后再去测一个序（如果基因合成公司有附带测序报告的话，可以不用测序），因为基因合成行业是有一个允许的错误几率的，虽然很小，但是一旦发生那就是100%。 然后，鉴定都正确了，就可以做表达载体了，双酶切你的表达载体和含有你目的基因的质粒，回收纯化之后，用T4连接酶进行连接，转化之后进行表达载体的鉴定和测序。如果目的片段很大的话，还是要16度过夜连接比较稳妥，比价小的话就有很多连接试剂盒可以用了。 最后，鉴定正确的表达载体可以进入下一步试验。 好运。 |
2楼2011-05-14 14:42:50
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.3小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
3楼2011-05-14 15:02:47
liyanying06
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 5.5
- 帖子: 44
- 在线: 64.6小时
- 虫号: 1262686
- 注册: 2011-04-12
- 专业: 保护生物学与恢复生态学
4楼2011-05-14 20:26:11
20