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liyanying06新虫 (初入文坛)
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[交流]
有人找公司合成过目的基因吗 已有2人参与
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我打算在目的基因上下游设计酶切位点，然后找公司合成。公司为我提供的是一份4ul的质粒和穿刺菌。如何将质粒上的目的基因克隆到我的表达载体上呢？ 我有三个方案： （1）将克隆载体和表达载体的混合体系一起进行双酶切； （2)先将载体双酶切，然后电泳回收目的基因，再克隆到表达载体上。 （3）PCR扩增目的基因，双酶切克隆到表达载体上。 请问哪种方法比较好一点？ 我刚开始做分子生物学，很多东西都不懂，希望有好心人帮助。在这里先谢谢大家啦。 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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lxj341401
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3楼2011-05-14 15:02:47
yabxxh
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-05-14 15:27:16
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-05-14 15:27:16
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...，你这个还是要补一下基础知识了，这个其实还是挺简单的。 首先，既然有穿刺菌，我觉得还是应该去摇个菌，提一下质粒，提完质粒之后做一个双酶切鉴定，然后再去测一个序（如果基因合成公司有附带测序报告的话，可以不用测序），因为基因合成行业是有一个允许的错误几率的，虽然很小，但是一旦发生那就是100%。 然后，鉴定都正确了，就可以做表达载体了，双酶切你的表达载体和含有你目的基因的质粒，回收纯化之后，用T4连接酶进行连接，转化之后进行表达载体的鉴定和测序。如果目的片段很大的话，还是要16度过夜连接比较稳妥，比价小的话就有很多连接试剂盒可以用了。 最后，鉴定正确的表达载体可以进入下一步试验。 好运。 |
2楼2011-05-14 14:42:50
liyanying06
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4楼2011-05-14 20:26:11
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