24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 489  |  回复: 3
本帖产生 1 个 博学EPI ,点击这里进行查看

clflying

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR问题求助!

提出的基因组进行PCR,至今无法出条带,温度梯度和浓度梯度都做了,之前用师兄做好的重组质粒来P是能够P出来的,引物和条件都是一样的,区别就是一个用的是重组质粒,一个用的是提出的基因组,但是基因组已经提过3次,试剂也都换了新的,不知道什么原因,请教各位大神!

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

phoenix2

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
clflying: 金币+2, 博学EPI+1, 有帮助, 谢谢。 2012-11-22 16:48:14
基因组扩PCR首先就是要注意浓度问题,基因组浓度不能太高,一般我们用试剂盒提出来以后都会稀释100-300倍,再用作模板,2就是内含子问题,基因组有内含子,看看内含子有多长,内含子过大也会影响PCR结果,3重组质粒相对浓度很高的,所以可能比较好P,可以试试2次PCR,4GC含量也是个问题,你可以试试GC buffer I,II, 再搭配相应的酶试试。不知道能不能帮到你。
3楼2012-11-21 17:15:59
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

8171532

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
clflying: 金币+2, 有帮助 2012-11-22 16:50:11
我觉得你要先确定一下你提的基因组有没有问题
各个条件都摸索了依然没结果,你试试取pcr后产物做模板再p一次,有的时候第一次没p出来,第二次就p出来了
还是出不来的话,如果你要的目的片段比较小的话,可以试试先P一段较长的序列,在此基础上再P你的目的条带
2楼2012-11-21 15:27:51
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

savmpaso

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

还有酶的问题,我当初扩一个大片段,用普通的Taq酶就不行,换成longTaq成功率就高了
4楼2012-11-22 09:36:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 clflying 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290调剂生物0860 +23 哇哈哈,。 2026-04-11 25/1250 2026-04-12 10:22 by 猪会飞
[考研] 一志愿厦大0856,306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 材料与化工调剂 10+11 下一站上岸@ 2026-04-10 36/1800 2026-04-11 10:26 by 89436494
[考研] 工科273调剂 +6 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:23 by zhq0425
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +11 LZH(等待调剂中 2026-04-10 11/550 2026-04-11 08:39 by zhq0425
[考研] 309求调剂 +14 wdhw 2026-04-10 15/750 2026-04-10 21:06 by zhouxiaoyu
[考研] 机械还有还有名额吗?太难了 +6 笑笑袁 2026-04-10 6/300 2026-04-10 11:54 by 高维春
[考研] 一志愿双非085400电子信息344 求调剂,对材料和化学方向也感兴趣 +8 无情的小羊 2026-04-09 9/450 2026-04-10 09:30 by 松花缸1201
[考研] 一志愿2110,化学学硕310分,本科重点双非求调剂 +18 努力奋斗112 2026-04-08 18/900 2026-04-09 23:28 by wolf97
[考研] 085404,285分求调剂 +12 薇薇考研 2026-04-07 14/700 2026-04-09 23:10 by parmtree
[考研] 已调剂 +18 柴郡猫_ 2026-04-09 19/950 2026-04-09 22:10 by 柴郡猫_
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +10 池池池池池池 2026-04-08 10/500 2026-04-09 17:10 by 独醉梦孤城
[考研] 考研调剂 +13 冰冰,,, 2026-04-07 13/650 2026-04-09 17:01 by Lilly_Li
[考研] 085400电子信息类(川大控制工程)求调剂可跨专业 求老师联系 +3 626776879 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:05 by 猪会飞
[考研] 材料307分求大佬组收留 +17 Hll胡 2026-04-07 17/850 2026-04-09 10:53 by liuhuiying09
[考研] 招收有机化学、化工,药学,食品灯专业学生 +3 yrfhjgdj 2026-04-08 3/150 2026-04-09 10:15 by QYQX_123
[考研] 308求调剂 +17 墨墨漠 2026-04-06 17/850 2026-04-09 09:25 by 壹往無前
[考研] 287求调剂 +6 Fnhc 2026-04-07 6/300 2026-04-08 10:05 by xingguangj
[考研] 求调剂到材料 +5 程9915 2026-04-06 5/250 2026-04-06 15:21 by yulian1987
信息提示
请填处理意见