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除暴安良

金虫 (小有名气)

木虫

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专业: 生物技术药物

[求助] 质粒转染293效率低

一直以来转染293细胞，效率很低，不到30%，不知为什么，同一个实验室，大家都是同样的提质粒，提的质粒也跑胶看着还可以，真是不知道为什么了。脂质体也用过3种。哎。谢谢大家帮忙啦。

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我喜欢这里。。。

1楼 2012-11-14 10:59:45

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tonight924

铁虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
除暴安良: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-11-14 15:33:18
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-14 16:35:55

1. 细胞密度，转染时细胞最好长到70-80%，细胞过多或者过少都会降低转染效率；
2. 质粒测个OD值吧，260/280在1.7-1.8之间比较好；
3. 如果转染试剂是需要换液的话，注意小心操作，不然会有细胞飘起来，从而降低转染效率；
4. 是否293细胞状态不好，或者有支原体污染。（如果发现细胞长得很慢，且培养基中有黑渣子，就很有可能）。

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2楼2012-11-14 12:14:22

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448935271

银虫 (小有名气)

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专业: 细胞增殖、生长与分化

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
除暴安良: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2012-11-14 15:33:32

我用的转染试剂是PEI,大概在细胞涨到1.5*10^6cell/ml的情况下做的转染，转然后要注意部分营养成分的补加

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万物皆有毒，只要剂量足

3楼2012-11-14 13:22:41

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